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申请/专利权人：银沙生物科技(杭州)有限公司
申请日：2023-08-21
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118184771A
主分类号：C07K16/00
分类号：C07K16/00;C12N15/10
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.02#实质审查的生效;2024.06.14#公开
摘要：本发明涉及一种单个B淋巴细胞克隆兔IgG重链全长基因的方法，利用分选到的分泌抗体IgG单个B淋巴细胞，通过设计特异性PCR引物，利用终点法单细胞PCR技术直接扩增抗体IgG重链的全长基因序列，即获得功能性IgG重链全长基因。完全摒弃了目前利用PCR方法或测序法仅能够克隆获得IgG抗体可变区基因序列，要完成兔IgG单克隆抗体的制备需要将重链可变区在体外与恒定区重组后才能够表达的缺陷。
主权项：1.一种单个B淋巴细胞克隆兔IgG重链全长基因的方法，其特征在于所述方法包括：1以兔外周全血为样本，利用密度梯度离心法，分离出淋巴细胞层，制备单核细胞悬液；2利用磁珠分选技术对步骤1所述的单核细胞悬液进行第一次分选，得到阳性B淋巴细胞悬液；利用微流控技术对所述的阳性B淋巴细胞悬液进行第二次分选，得到单细胞；3用单细胞裂解液对步骤2所述的单细胞进行裂解，所得裂解液通过反转录合成cDNA；4以步骤3所述的cDNA为模板，以正向引物和反向引物进行PCR扩增，得到所述单个B淋巴细胞克隆兔IgG重链全长基因；所述正向引物为下列之一： 所述反向引物为下列之一：
全文数据：
权利要求：
百度查询： 银沙生物科技(杭州)有限公司 单个B淋巴细胞克隆兔IgG重链全长基因的方法
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