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申请/专利权人：南京农业大学

摘要：本发明公开了一种食品中志贺氏菌快速检测的方法，属于微生物快速检测领域。本检测方法包括以下步骤：对油溶性上转换荧光材料进行氨基修饰、羧基修饰，将志贺氏菌适配体和互补链分别修饰在金纳米和上转换荧光材料表面，利用适配体和互补链之间碱基互补配对作用，构建上转换‑金纳米荧光检测体系；利用上转换材料和金纳米之间的荧光共振能量转移作用探究志贺氏菌菌液浓度和荧光信号强度之间的关系。本发明建立的检测体系具有较宽的检测范围和较低的检测限，其中线性检测范围为1.2×102CFUmL‑1.2×108CFUmL，检测限为30CFUmL，灵敏度较高，并且能够特异性地检测食品中的志贺氏菌。

主权项：1.一种基于上转换-金纳米荧光共振能量转移的志贺氏菌快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，制备得到油溶性上转换荧光纳米颗粒：将六水氯化钇、六水氯化钆、六水氯化镱以及六水氯化铒四种材料和乙醇、油酸、1-十八烯混合放置于三口烧瓶中，全程在氮气的保护下加热升温，随后冷却至室温；将氟化铵、氢氧化钠分散于甲醇溶液中，并缓慢加入冷却体系中，分两阶段水浴加热；在氮气的保护下，再次对反应体系进行加热，反应结束后冷却至室温，用乙醇和环己烷进行多次离心清洗，真空干燥后得到油相的上转换纳米材料；步骤2，制备阿仑磷酸修饰上转换荧光纳米颗粒：将步骤1得到的油相上转换荧光纳米材料溶于三氯甲烷、乙醇和阿仑磷酸的混合溶液中，超声后置于离心管中，通过pH试纸调节pH值，使整个体系在酸性的环境下进行搅拌混合；反应结束后用纯水和乙醇对材料进行多次清洗，最终分散在纯水中，获得了水溶性上转换荧光材料；步骤3，制备羧基修饰上转换荧光纳米颗粒：将步骤2得到的水溶性上转换荧光纳米材料溶于甲苯后超声，然后加入丁二酸酐，全程在氮气保护下，在水浴锅中加热升温，并保持一段时间，反应结束后，利用甲苯、纯水和乙腈多次清洗，真空干燥后得到羧基修饰的上转换荧光纳米材料；步骤4，羧基修饰的上转换荧光纳米材料修饰互补链：将步骤3制备的羧基修饰上转换荧光纳米颗粒分散在吗啉乙磺酸缓冲溶液MES中进行超声处理；将碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS混合溶液加入到上述溶液中进行搅拌反应，反应结束后用磷酸盐缓冲溶液PBS多次清洗，并重新分散在PBS溶液中，再将志贺氏菌的适配体互补链添加到溶液中搅拌反应，最后用PBS缓冲液多次清洗得到互补链修饰的上转换荧光纳米材料；步骤5，合成金纳米材料：将氯金酸溶液加热至沸腾后，加入柠檬酸三钠溶液，待重新沸腾后反应一段时间，反应结束后关闭热源，待溶液冷却后备用；步骤6，构建上转换-金纳米检测体系：将金纳米与志贺氏菌适配体进行连接，后添加修饰志贺氏菌互补链的上转换荧光纳米材料，最后加入志贺氏菌进行荧光信号强度测定，以志贺氏菌浓度为横坐标，荧光信号强度为纵坐标，构建标准曲线；步骤7，验证检测体系特异性：选择不同种类的标准菌株重复检测过程，记录输出的荧光信号强度。

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