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申请/专利权人：沈阳农业大学

摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及牛个体识别和亲子鉴定的微卫星标记17‑plex快速检测方法。本发明应用多重PCR技术，通过引物设计和大量试验,研发了一套基于微卫星标记的牛个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括：确定牛的16个微卫星位点和1个性别鉴定位点并合成引物、PCR扩增得到16条目标微卫星序列和1条性别鉴定结果；将所述16对微卫星引物和1对性别鉴定引物合成17对荧光引物。本发明简便、高效，可实现一次PCR反应即获得16个牛微卫星标记的分型结果，同时可鉴定检测样品的性别。扩增结果稳定且具有良好的灵敏度，适用于牛的个体识别、亲子鉴定，以及基于微卫星标记的牛群体遗传学研究。

主权项：1.一种牛个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组，其特征在于：由16对微卫星引物序列及一对性别鉴定位点引物序列组成，17对引物序列及携带的荧光标记为：微卫星位点ETH10，引物序列F:GGCATGTCTCTGCTTGATATTAG，R:AGCTCTGTCCAGCGGGTT；产物范围434-450bp，引物终浓度58nML，携带标记为FAM；微卫星位点CSSM66，引物序列F:TGCAAACTTGGACACAACTG，R:GCTCGTGGCAAGGGCT；产物范围390-416bp，引物终浓度80nML，携带标记为FAM。微卫星位点BM2113，引物序列F:GTGCTGCCTTCTACCAAATACC，R:CACAGAGAAGGTCCTCGGTC；产物范围252-264bp，引物终浓度27nML，携带标记为FAM；微卫星位点INRA023，引物序列F:GTTGCTTTTACCTGGCTAAT，R:ACTTGGCAAATGAGTAGTAAAC；产物范围215-239bp，引物终浓度45nML，携带标记为FAM；微卫星位点BM1824，引物序列F:TAAACTAAAAGATAGTAGAGCAAGG，R:CTTCCTTGAAATGGTGCG；产物范围182-194bp，引物终浓度27nML，携带标记为FAM；微卫星位点HAUT27，引物序列F:TGTTTGCTTGTTGATATTGAGCT，R:TTAGCCATCATTATCTTTACTCTGAT；产物范围143-161bp，引物终浓度38nML，携带标记为FAM；微卫星位点TGLA126，引物序列F:CTGGGCTTCCTTTCATTG，R:ATCTGGTCTTTGGACTGTTG；产物范围460-476bp，引物终浓度80nML，携带标记为HEX。微卫星位点ETH3，引物序列F:TTGTTGTTTAGTGGCTGAGTG，R:ACCCCCTGTGACACAATCA；产物范围421-449bp，引物终浓度24nML，携带标记为HEX；微卫星位点BM1818，引物序列F:ATTTATACTAGCCAAGCAAGCCATG，R:TTCAGCAAACATCCATCTTCTCCT；产物范围380-404bp，引物终浓度24nML，携带标记为HEX；微卫星位点ETH225，引物序列F:CTACTTGGGGGAAAAGAGCA，R:ATGTGGATCACAAGCACCATAAT；产物范围334-356bp，引物终浓度34nML，携带标记为HEX；微卫星位点TGLA227，引物序列F:AGTGAACCCCCAAAAATG，R:GCCCAGGAATTCCAAATC；产物范围171-199bp，引物终浓度49nML，携带标记为HEX；微卫星位点ILSTS006，引物序列F:AACACGGAAGCAATCTAAAC，R:ACCCATGTCTCTGCAAATG；产物范围148-166bp，引物终浓度36nML，携带标记为HEX；微卫星位点TGLA122，引物序列F:CTCCTGTTGAGCCCAGCATTT，R:AATCACAAGGGGAAAAGAGTAGGA；产物范围446-492bp，引物终浓度80nML，携带标记为ROX。微卫星位点SPS115，引物序列F:CAGACGGTCCCCAACGATG，R:CCGAGTGTCCTAGTTTGGCTGT；产物范围329-343bp，引物终浓度43nML，携带标记为ROX；微卫星位点CSRM60，引物序列F:GAAGACTGTGGTCAGCGGAAG，R:GGTTTTCAGGACCAGATCGTG；产物范围290-318bp，引物终浓度80nML，携带标记为ROX；性别鉴定位点Amel，引物序列F:ACCAGCCAAACCTCCCTCT，R:CTCCCGCTTGGTCTTGTCTG；产物范围220-283bp，引物浓度，携带标记为ROX；微卫星位点TGLA53，引物序列F:GCTTTCAGAAATAGTTTGCATTC，R:TCTTCACATGATATTACAGCAGAC；产物范围151-187bp，引物终浓度80nML，携带标记为ROX。

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百度查询： 沈阳农业大学 用于牛个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其17-plex快速分型检测方法