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申请/专利权人：吉林农业大学

摘要：用于检测水貂圆环病毒和水貂阿留申病毒的双重荧光定量PCR试剂盒，涉及病毒检测领域，包括引物、探针、2XTaqManFastqPCR预混液、ddH2O、阳性质控品和阴性质控品；MiCV‑F：AGGGCCTTTGGGCATCATTG；MiCV‑R：CCCGCCTGCAAACTGAAGAA；AMDV‑F：GGAAGAAGAAGGTTGGC；AMDV‑R：AACTGTTGGTTGGTATGAG；MiCV‑P：ACGGAGTTGCTGCAGATGCCACGGT；AMDV‑P：TGCTGCTTCAGGCACACA。该试剂盒能同时检测水貂圆环病毒和水貂阿留申病毒，特异性强、敏感性高和可重复性好。

主权项：1.用于检测水貂圆环病毒和水貂阿留申病毒的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒的反应总体系包括：双重荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；所述双重荧光定量PCR反应液包括上游引物MiCV-F、下游引物MiCV-R、上游引物AMDV-F、下游引物AMDV-R、探针MiCV-P、探针AMDV-P、2XTaqManFastqPCR预混液和ddH2O；上游引物MiCV-F：AGGGCCTTTGGGCATCATTG；下游引物MiCV-R：CCCGCCTGCAAACTGAAGAA；上游引物AMDV-F：GGAAGAAGAAGGTTGGC；下游引物AMDV-R：AACTGTTGGTTGGTATGAG；探针MiCV-P：ACGGAGTTGCTGCAGATGCCACGGT；探针AMDV-P：TGCTGCTTCAGGCACACA；所述探针MiCV-P的5'端为荧光基团FAM标记，所述探针MiCV-P的3'端为荧光淬灭基团TAMR标记；所述探针AMDV-P的5'端为荧光基团ROX标记，所述探针AMDV-P的3'端为荧光淬灭基团BHQ2标记；该双重荧光定量PCR试剂盒的使用方法如下：1病毒DNA的提取使用商品化的病毒核酸提取试剂盒提取待检样品中的病毒DNA，按试剂盒说明书方法进行操作；2双重荧光定量PCR扩增取出双重荧光定量PCR反应液，室温融化并颠倒混匀，分别向各PCR反应管中加入18μLPCR反应液，再分别向设定的PCR反应管中加入提取的待检样本DNA、阴性质控品和稀释好的阳性质控品各2μL，盖紧管盖，置于荧光PCR仪上，设定反应程序如下：95℃3min；45个循环：95℃10s，57℃40s。

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