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申请/专利权人：新乡医学院
摘要：本发明公开了一种基于CRISPRCas9构建Npc1及Npc1Trem2基因敲除细胞系的方法，该细胞系采用以下步骤制备：靶点设计及sgRNA序列合成；载体构建；细胞转染；单克隆筛选；敲除细胞系鉴定后获得Npc1基因敲除成功的单克隆细胞系；在Npc1基因敲除的BV2细胞系基础上，重复上述步骤获得Npc1Trem2双基因敲除成功的单克隆细胞系。本发明建立的Npc1及Npc1Trem2基因敲除的BV2细胞系，将为深入研究C1型尼曼匹克病的疾病机制、基因功能及以Trem2为靶点进行干预等提供更直接有效的细胞研究和干预模型，具有较大的应用研究价值。
主权项：1.基于CRISPRCas9构建Npc1基因敲除细胞系的方法，其特征在于：设计合成靶向Npc1基因的sgRNA序列，将合成的sgRNA序列和Cas9蛋白孵育结合为RNP复合物，采用Neon转染系统进行细胞转染，随后筛选单克隆生长的细胞，经过鉴定后获得敲除Npc1基因的BV2细胞系，其中靶向Npc1基因的sgRNA序列包括sgRNA1和sgRNA2：sgRNA1：TGAGGTCTCGGATCAGAGCGTGG；sgRNA2：AGGGCCGAAGGTTACAACTGTGG。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 新乡医学院 基于CRISPR/Cas9构建Npc1及Npc1/Trem2基因敲除细胞系的方法
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