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一种人类静脉血栓风险基因PAI-1,THBD和PROC基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用 

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申请/专利权人:华捷生物科技(青岛)有限公司

摘要:本发明公开的属于多态性检测技术领域,具体为一种人类静脉血栓风险基因PAI‑1,THBD和PROC基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用,包括同时检测PAI‑14G5G、THBDc.‑151GT和PROC565CT(rs146922325)和PROCc.574_576del基因多态性的试剂盒,所述试剂盒包括试剂A、试剂B、阳性质控A、阳性质控品B和阴性对照,所述试剂A包括PAI‑14G5G野生型和THBDc.‑151GT野生型的特异性引物及普通探针和配对引物,PROC565CT上下游引物、PROC565CT野生型和突变型特异性探针,TaqDNA聚合酶、10xbuffer,dNTP和BSA,本发明使用PCR‑荧光探针法,扩增反应及检测采用完全封闭的系统,避免产生气溶胶污染导致的假阳性,操作方法简单,检测周期短,检测成本低,灵敏度和特异性好。

主权项:1.一种人类静脉血栓风险基因PAI-1,THBD和PROC基因多态性检测试剂盒,其特征在于:包括同时检测PAI-14G5G、THBDc.-151GT和PROC565CT(rs146922325)和PROCc.574_576del基因多态性的试剂盒,所述试剂盒包括试剂A、试剂B、阳性质控A、阳性质控品B和阴性对照;所述试剂A包括PAI-14G5G野生型和THBDc.-151GT野生型的特异性引物及普通探针和配对引物,PROC565CT上下游引物、PROC565CT野生型和突变型特异性探针,TaqDNA聚合酶、10xbuffer,dNTP和BSA;所述试剂B包括PAI-14G5G突变型和THBDc.-151GT突变型的特异性引物及普通探针和配对引物,PROCc.574_576del上下游引物、PROCc.574_576del野生型和突变型特异性探针,TaqDNA聚合酶、10xbuffer,dNTP和BSA;所述阳性质控A包括PAI-14G5G野生型质粒1条,THBDc.-151GT野生型质粒1条,PROC565CT等位基因野生型和突变型质粒各1条制备成混合液;所述阳性质控品B包括PAI-14G5G突变型质粒1条,THBDc.-151GT突变型质粒1条,PROCc.574_576del等位基因野生型和突变型质粒各1条制备成混合液;所述阴性对照为无菌去离子水;所述PAI-14G5G的引物和探针为:PAI-14G-F5’-3’:GAGAGTCTGGACACGTGtGGA;PAI-15G-F5’-3’:AGAGTCTGGACACGTGGtGGA;PAI-14G5G-R5’-3’:GGACTCTTGGTCTTTCCCTCAT;PAI-14G5G-P5’-3’:FAM-TCAGCCGTGTATCATCGGAGGCG-BHQ1;所述THBDc.-151GT的引物和探针为:THBDc.-151GT-F5’-3’:ACCAGGACCCCAAGCATGTTA;THBDc.-151G-R5’-3’:CATGTCAGAGGCTGCCTCG;THBDc.-151T-R5’-3’:CATGTCAGAGGCTGCCTCT;THBDc.-151GT-P5’-3’:HEX-CTGCGCGCAGCGGCAAGAAG-BHQ1;所述PROC565CT的引物和探针为:PROC565CT–F5’-3’:GCCTACCTCAGTGAAGTTCCC;PROC565CT–R5’-3’:CGCTTGTCTTCTGTGTCTCG;PROC565C–P5’-3’:ROX-TGGAAG+CGGATGGAGAAG-BHQ2;PROC565T–P5’-3’:CY5-TGGAAG+TGGATGGAGAAG-BHQ2;所述PROCc.574_576del的引物和探针为:PROCc.574_576del–F5’-3’:GCCTACCTCAGTGAAGTTCCC;PROCc.574_576del–R5’-3’:CGCTTGTCTTCTGTGTCTCG;PROCc.574_576dup–P5’-3’:ROX-CTGCGCT+TCTTCTCCATC-BHQ2;PROCc.574_576del–P5’-3’:CY5-GACTGCGCTTCT+CCATC-BHQ2;其中,+N表示LNA修饰碱基,小写字母代表错配碱基。

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