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一种MHC-peptide复合物分离方法及应用 

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申请/专利权人:百蓁生物科技(上海)有限公司

摘要:本发明提出了一种MHC‑peptide复合物分离方法及应用,该方法包括以下步骤:制备RAM小柱,乙酸铵活化RAM小柱,MHC‑peptides复合物样本制备,上样,乙酸铵反复清洗RAM小柱,乙腈乙酸铵溶液洗脱,流穿液用离心浓缩仪吹干成肽段干粉,并用液质连用方法对免疫肽进行检测。本发明提供的RAM材料能有效改善MHC‑I疏水性肽段的覆盖,减少反相材料分离导致的疏水性高肽段的损失,减少了保留过程中的污染。

主权项:1.一种MHC-peptide复合物分离方法,其特征在于:包括如下步骤:S1,制备RAM小柱:用筛板堵住枪头,取RAM材料置于筛板上,然后离心压实;S2,RAM小柱活化:加入乙酸铵离心活化;S3,样本制备:取MHC-peptides复合物干粉用乙酸铵复溶,离心后取上清备用;S4,上样:将步骤S3步制备好的样本加入到步骤S2活化好的RAM小柱上,离心后接流穿液;S5,重复上样:将步骤S4的流穿液加入RAM小柱,重复步骤S4操作1次;S6,清洗:加入乙酸铵,离心后弃流穿,重复清洗操作4次;S7,洗脱:加入乙腈乙酸铵溶液,离心后收集留穿液,重复洗脱操作1次,合并两次流穿液,用离心浓缩仪吹干成肽段干粉;S8,步骤S7的肽段干粉用甲酸复溶后,采用LC-MSMS仪检测。

全文数据:

权利要求:

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