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申请/专利权人：西南医科大学
摘要：本发明公开了一种去除新冠病毒核衣壳蛋白体系中核酸污染的方法。本发明通过PEI、NH2SO4和镍柱过滤相结合的方式，能够将新冠病毒核衣壳蛋白体系中的核酸全部去除，可以有效消除核酸对蛋白的不利影响。本申请中的纯化方法流程简单、成本低，易操作，可以在短时间内获得大量用于疫苗或药物开发研究的无核酸污染的核衣壳蛋白。而且，由于核衣壳蛋白具有相似的特征并具有很强的与核酸结合能力，它们被核酸污染的问题可以看作不仅限于SARS‑CoV‑2病毒的蛋白质，因此，本发明中的方法同样适用于纯化来自其他病毒的核衣壳蛋白，为病毒核衣壳蛋白的纯化提供了新的思路。
主权项：1.一种去除新冠病毒核衣壳蛋白体系中核酸污染的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：获得含核衣壳蛋白的菌体；S2：将含核衣壳蛋白的菌体与破碎液按50mg:3mL的料液比混合，然后超声破碎，再离心，收集上清液；向上清液中加入PEI，使PEI终浓度为0.1～0.3％，然后静置、离心，收集上清液，得处理液一；所述破碎液的pH为8，其包含50mMTris-HCl、1MNaCl、10％甘油和1mMDTT；S3：向处理液一中加入饱和NH2SO4溶液，至体系中NH2SO4含量为60％，然后静置、离心，收集沉淀，并将沉淀溶于平衡液中，得到处理液二；所述平衡液的pH为8，其包含50mMTris-HCl和1MNaCl；S4：将处理液二装入35000D的透析袋中，用透析缓冲液进行透析；S5：将透析后的样品装入镍柱，依次用洗脱液一、洗脱液二和洗脱液三洗脱，收集洗脱液三洗脱出的样品；所述脱液一的pH为8，其包含50mMTris-HCl，1MNaCl和10mM咪唑；所述脱液二的pH为8，其包含50mMTris-HCl，1MNaCl和50mM咪唑；所述脱液二的pH为8，其包含50mMTris-HCl，1MNaCl和1M咪唑；S6：将S5中收集的样品装入35000D的透析袋中，用透析缓冲液进行透析，得纯化后的核衣壳蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西南医科大学 一种去除新冠病毒核衣壳蛋白体系中核酸污染的方法
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