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申请/专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
摘要：本发明公开了一种根癌农杆菌介导的黑木相思高效遗传转化体系及其构建方法，以黑木相思优良无性系SR3茎段为外植体，并研制不定芽诱导的培养基，采用含有重组农杆菌的侵染液侵染黑木相思不经过预培养的茎段，然后进行浸染和共培养，将外植体进行转基因株系的诱导和筛选培养，得到黑木相思抗性芽，再筛选得到完成遗传转化的黑木相思阳性植株。其中，通过对实验条件的优化来提高不定芽的诱导率以及获得高效的遗传转化；本发明为本源植物的基因导入和敲除等功能研究提供技术支持，有利于解析黑木相思心材形成、发育等的分子机理，为黑木相思重要基因的功能解析提供参考，且可以在黑木相思优良无性系的基础上进一步获得转基因和基因编辑新品种。
主权项：1.一种根癌农杆菌介导的黑木相思高效遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤1：侵染根癌农杆菌：挑取活化后的农杆菌单菌落，转接到LB液体培养基中，在恒温摇床中培养16-24h至菌液OD600值为0.5，离心，移除上清，加入等体积的WPM+的蔗糖重悬液将沉淀的菌体重新悬浮；步骤2：将切取的外植体茎段用农杆菌浸染：将切取的外植体茎段放置在重悬浮的农杆菌菌液中浸泡并轻微晃动，取出吸取表面菌液，转移到表面铺有无菌滤纸的共培养培养基上暗培养；步骤3：筛选培养外植体抗性芽：将共培养后的茎段转移到添加在含有Cef和Kan的愈伤组织诱导培养基上进行筛选培养，定期更换一下培养基，更换时去除褐化、死去的外植体，得到带有芽点的外植体；步骤4：将带有芽点的外植体进行筛选培养和检测。
全文数据：
权利要求：
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