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申请/专利权人：皖西学院

摘要：本发明公开了一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法，属于医药生物技术领域。操作步骤如下：1将新鲜蕨菜，‑50℃以下冷冻干燥，粉碎，获得冻干粉；2将冻干粉进行正丁醇冷凝回流提取2遍，合并滤液，减压回收正丁醇得浸膏，冷冻干燥，获得正丁醇提取物；3将正丁醇提取物正向硅胶柱层析分离，使用氯仿‑甲醇梯度洗脱，减压浓缩，获得原蕨苷粗品；4将原蕨苷粗品进行C18反向柱纯化精制，30％甲醇除杂，45％甲醇洗脱，低温冷冻干燥除去溶剂，获得纯度大于98％的原蕨苷。本发明原蕨苷的提取率可达65％，为药物开发提供了可能；本发明具有分离样品量大、目标物质损失少、提取率高、装置简单、操作简便、适合工业化生产的优点。

主权项：1.一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法，其特征在于操作步骤如下：（1）制备冻干粉将新鲜的蕨菜，在温度-50℃以下冷冻干燥，粉碎，获得冻干粉；粉碎过40目筛；（2）制备正丁醇提取物将冻干粉进行正丁醇冷凝回流提取，过滤，滤渣进行正丁醇冷凝回流提取，合并滤液，减压回收正丁醇得浸膏，-50冷冻干燥至恒重，获得正丁醇提取物；按照料液比1g：15mL在冻干粉中加入正丁醇，温度85℃条件下回流提取1.5h；（3）制备原蕨苷粗品将正丁醇提取物进行正向硅胶柱层析分离，采用按体积比30：1的氯仿-甲醇、按体积比15：1的氯仿-甲醇和按体积比10：1氯仿-甲醇依次进行梯度洗脱，收集体积比10：1的氯仿-甲醇洗脱液，减压浓缩，获得原蕨苷粗品；具体操作如下：将正丁醇提取物溶解于甲醇中，加入200-300目正向硅胶混匀，减压浓缩至完全干燥，得到拌样硅胶，过200目筛；将200-300目正向硅胶装入层析柱并压实，将分离硅胶表面震荡平整，依次加入拌样硅胶、保护硅胶；采用体积比30：1的氯仿-甲醇进行洗脱，以除去浸膏中部分极性较原蕨苷小的部分杂质；继以体积比15：1的氯仿-甲醇进行洗脱，以除去浸膏中与原蕨苷极性更为接近的小极性杂质；最后用体积比10：1的氯仿-甲醇进行洗脱，收集体积比10：1的氯仿-甲醇洗脱液，45℃减压浓缩，获得原蕨苷粗品；（4）制备原蕨苷将原蕨苷粗品进行C18反向柱纯化，用浓度30％的甲醇溶液除杂，用浓度45％的甲醇溶液洗脱，收集浓度45％的甲醇溶液洗脱部分，低温冷冻干燥除去溶剂，甲醇重结晶，获得纯度大于98%的原蕨苷，所述原蕨苷为白色粉未状；具体操作如下：将C18反向硅胶填料装入玻璃层析柱，活化后依次用双蒸水洗脱、体积浓度10%的甲醇溶液平衡；将原蕨苷粗品溶解在体积浓度10%的甲醇溶液中，0.22μm滤膜过滤，滤液缓慢滴加到经双蒸水洗脱、浓度10%的甲醇溶液平衡的C18反向柱上，以体积浓度10%的甲醇溶液、体积浓度30％的甲醇溶液依次洗脱，除去部分极性大于原蕨苷的杂质，然后使用体积浓度45％的甲醇溶液洗脱，收集体积浓度45％的甲醇溶液洗脱部分，-20℃预冻24h，使用冷冻干燥机在-105℃下将洗脱液冻干，甲醇重结晶3次，获得纯度98%的原蕨苷。

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