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申请/专利权人：黑龙江八一农垦大学
摘要：本发明公开了一种外源添加AKG缓解冷诱导肺泡巨噬细胞活化的应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过q‑PCR试验，对比在正常小鼠和冷刺激小鼠饲料中添加AKG后的炎症因子表达情况的差异；S2、体内实验：分离原代肺泡巨噬细胞，采集肺脏组织，提取总蛋白和总RNA用于分析炎症因子在冷刺激条件下饲喂正常饲料和在饲料中添加AKG的小鼠中的表达。本发明可以通过食用饲料缓解炎症，降低炎症因子的表达，只需要在饲料中添加AKG，方便快捷，不易产生耐药性和其他抗生素污染，而且不会对小鼠产生应激反应，有利于小鼠炎症的缓解。
主权项：1.一种外源添加AKG缓解冷诱导肺泡巨噬细胞活化的应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过q-PCR试验，对比在正常小鼠和冷刺激小鼠饲料中添加AKG后的炎症因子表达情况的差异；S2、体内实验：分离原代肺泡巨噬细胞，采集肺脏组织，提取总蛋白和总RNA用于分析炎症因子在冷刺激条件下饲喂正常饲料和在饲料中添加AKG的小鼠中的表达；S3、体外实验：小鼠肺泡巨噬细胞中炎症因子表达水平检测。对照组和加LPS刺激组的肺泡巨噬细胞提取总蛋白和总RNA，用于分析在LPS刺激的条件下正常培养基和在添加AKG的培养基中细胞炎症因子的表达情况，免疫荧光检测小鼠巨噬细胞的标志物；S4、AKG对肺泡巨噬细胞炎症因子抑制作用的试验选择长势良好且密度约为80％的MH-S细胞，将培养瓶中的细胞接种于10cm细胞培养皿中继续培养，待细胞密度达60-70％时，将培养皿中的上清弃去，用PBS清洗一次，LPS刺激作为阳性对照，添加AKG和LPS处理6h造模，收集培养皿中的肺泡巨噬细胞，收集好的细胞用提取细胞中的总蛋白并应用BCA蛋白浓度测定法将细胞中的总蛋白含量统一用于后续试验。在接下来的实验中采用Westernblot实验技术检测肺泡巨噬细胞中iNOS、IL-1β、和TNF-α的蛋白表达情况。
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权利要求：
百度查询： 黑龙江八一农垦大学 一种外源添加AKG缓解冷诱导肺泡巨噬细胞活化的应用
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