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申请/专利权人:陕西师范大学
摘要:本发明公开了一种基于DIA标记蛋白鉴定大熊猫初乳与成熟乳的方法,该方法采用DIA蛋白质组学定量分析技术,对大熊猫初乳和成熟乳中蛋白进行定量和定性,将蛋白质水平在大熊猫初乳与成熟乳中具有明显差异的蛋白作为标记蛋白,从而根据标记蛋白判断其为初乳和成熟乳。本发明首次鉴定了大熊猫乳汁中的蛋白质,为筛选反映大熊猫初乳和成熟乳的标记蛋白提供了依据,而且可以依据蛋白质水平结果判定大熊猫初乳和成熟乳,提供了一种新的品质评价方法。
主权项:1.一种基于DIA标记蛋白鉴定大熊猫初乳与成熟乳的方法,其特征在于由以下步骤组成:1采集大熊猫初乳样品与成熟乳样品,分别提取乳中的蛋白;2将步骤1提取的蛋白混合,进行肽段酶解,并以DDA模式质谱分析进行数据采集,构建谱图库;3将步骤1提取的蛋白分别进行肽段酶解,以DIA模式质谱分析进行数据采集;4对步骤3中获得的数据采用步骤2构建的谱图库进行定性定量分析,以定性后的肽段在初乳样品与成熟乳样品中的相对定量值之比的对数值作为判断蛋白丰度水平变化的依据,该对数值大于1.5则为上调蛋白,该对数值小于23则为下调蛋白,该对数值处于1.5和23之间则该蛋白丰度在初乳和成熟乳样品中无显著变化;5将步骤4获得的初乳样品与成熟乳样品中上调蛋白和下调蛋白按对数值从大到小排序,分别取上调蛋白中前5%和下调蛋白中后5%的蛋白作为标记蛋白,如果标记蛋白包含正相关的标记蛋白:含肽酶S1结构域的蛋白质、排序nexin-2蛋白、EF-hand结构域蛋白、肽聚糖识别蛋白1,则说明待测大熊猫乳样品为初乳;如果标记蛋白包含负相关的标记蛋白:ATP-柠檬酸裂解酶、ATP合酶亚基、谷氨酰胺合成酶、柠檬酸合成酶、40S核糖体蛋白S25、延伸率Tu、含硫氧还蛋白结构域蛋白、含TGc结构域蛋白、Ribosomal_L18eL15P结构域蛋白、Ethylmalonyl-CoA脱羧酶1,则说明待大熊猫乳样品为成熟乳。
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