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申请/专利权人：中国海洋大学
摘要：本发明属于分子生物学检测技术领域，涉及一种海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法，包括取组织样清洗剪碎，加入试剂后破碎，加入酶进行消化，然后离心、过凝胶柱，经过多次过凝胶柱及离心等处理过程提取到DNA；提取的DNA进行纯化，然后依次经过引物退火、酶切反应、连接接头、PCR1、琼脂糖凝胶检测、PCR2、琼脂糖凝胶检测、样本纯化和筛选、琼脂糖凝胶检测步骤建立基因组文库。该提取方法适用于海洋腹足类DNA提取，使提取的DNA质量提升，能够满足海洋腹足类简化基因组建库的要求；并通过改进简化基因组建库的步骤，解决了现有技术中存在的海洋腹足类简化基因组建库的产量及成功率问题。
主权项：1.一种海洋腹足类DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1向离心管中加入CTAB溶液和β-巯基乙醇，然后取组织样清洗，加入离心管中，剪碎，再向离心管中加入交联聚乙烯吡咯烷酮，破碎3～5次，每次粉碎时间25～35s；2将破碎好的离心管放入金属浴中，50～60℃下孵育7～13min，然后加入蛋白酶K和RNA酶，50～60℃下孵育3.8～4.2h，孵育期间每隔30min充分震荡一次离心管；3离心，室温冷却4～6min后，转移上清液于凝胶柱中，向凝胶柱中加入等体积预混V苯酚:V氯仿:V异戊醇＝25:24:1，颠倒混匀8～12min，然后在4℃下14000r离心8～12min；取上清液于离心管中，加入等体积的V氯仿:V异戊醇＝24:1，颠倒混匀8～12min，然后在4℃下14000r离心8～12min；再次取上清液于新的离心管中，加入等体积的异丙醇，颠倒20～30次，室温孵育4～6min，在4℃下14000r离心25～35min；4弃上清液，加入75％冰乙醇混匀，4℃，14000r离心8～12min，弃上清液，加入70％冰乙醇混匀，4℃，14000r离心1.5～2.5min，再次弃上清液，开盖并放于通风处晾干17～23min，加入无RNase的水，放于4℃冰箱溶解过夜。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国海洋大学 海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法
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