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申请/专利权人:青岛农业大学;榆林学院;西南大学
摘要:本发明公开了一种右旋糖酐磁珠模拟BoHV‑1病毒粒子的制备,步骤如下:S1、合成牛疱疹病毒gB、gC、gD蛋白基因;S2、构建真核表达重组质粒;S3、真核表达质粒转染MDBK细胞;S5、真核表达蛋白纯;S7、右旋糖酐磁珠磁珠模拟BoHV‑1病毒粒子制备。本发明采用上述的一种右旋糖酐磁珠模拟BoHV‑1病毒粒子的制备与应用,通过将囊膜蛋白固定在右旋糖酐磁珠表面制备出粒径小,却具有近乎BoHV‑1完整抗原性的亚单位疫苗,同时通过PEG化还可以延长蛋白在体内的存在时间,来延长免疫反应持续期。
主权项:1.一种右旋糖酐磁珠模拟BoHV-1病毒粒子的制备,其特征在于,步骤如下:S1、合成牛疱疹病毒gB、gC、gD蛋白基因按照GeneBank公布的BoHV-1gB、gC、gD基因序列,合成各个基因后,在gB上游加入HindⅢ酶切位点,其下游加入AgeⅠ酶切位点,gCgD上游加入KpnⅠ酶切位点,其下游加入BSTBⅠ酶切位点;S2、构建真核表达重组质粒合成基因与pcDNA4-Myc-his真核表达质粒双酶切后连接构建pcDNA4-gB-hispcDNA4-gC-hispcDNA4-gD-his真核表达质粒,真核表达质粒转化DH5α大肠杆菌感受态以后,挑菌纯化后大量培养使用英国biologicaltool无内毒素质粒大提试剂盒提取以上真核表达质粒;S3、真核表达质粒转染MDBK细胞用PEI磁珠质粒转染法将以上真核表达质粒转染MDBK细胞系;S4、构建真核表达细胞系转染48h后加入含有10%FBS和500μgmLzeocineDMEM培养基37℃5%CO2培养48h将未转染成功的细胞杀死;S5、真核表达蛋白纯收取细胞培养上清和转染成功MDBK细胞,MDBK细胞经超声破碎后,12000×g离心30分钟沉淀细胞碎片收取上清用于下步纯化;S6、真核表达蛋白鉴定;S7、右旋糖酐磁珠磁珠模拟BoHV-1病毒粒子制备。
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