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申请/专利权人：浙江大学

摘要：本发明公开了CHCHD10在促进AChR亚基基因表达和维持NMJ稳定中的应用。本发明通过免疫组化、电生理、电镜以及行为学等实验技术手段来探究骨骼肌中CHCHD10对NMJ稳态的调控作用；沉默或敲除CHCHD10基因能引起细胞或组织ATP水平下降，提示ATP的产生依赖于CHCHD10的表达；也进一步证实了ATP能促进Agrin诱导的AChR聚集；通过染色质免疫沉淀实验可得，ATP可以促进转录因子GABPα与AChR亚基基因的启动子结合；这提示着ATP通过促进AChR亚基基因表达，进而促使Agrin诱导的AChR聚集，从而维持NMJ正常的功能；本发明提示了靶向NMJ可能是早期治疗和干预ALS和其他神经肌肉疾病的重要手段。

主权项：1.CHCHD10在促进AChR亚基基因表达和维持NMJ稳定中的应用，其特征在于，CHCHD10为骨骼肌中的CHCHD10；CHCHD10和突触后AChR聚集体有共定位，CHCHD10在神经肌肉接头突触后高表达；运用设计的CHCHD10的sgRNA转染C2C12细胞，并加入1nMAgrin刺激16小时，染色发现，在未转染的肌管中，聚集蛋白可以促进AChR簇的形成；用表达GFP或GFP-IRES-Cre的腺病毒感染离体培养的CHCHD10ff小鼠原代肌肉细胞，待肌源细胞分化成肌管后，聚集蛋白Agrin刺激16小时，结果表明肌肉CHCHD10对于Agrin诱导的AChR聚集是必需的；CHCHD10介导线粒体产生的ATP能够调控Agrin诱导的AChR聚集；检测AChR亚基的mRNA水平采用实时荧光定量PCR，在C2C12肌管细胞中用ATP孵育后，AChRα，AChRβ，AChRδ和AChRγ的mRNA水平显著提高，ATP是通过调节AChR亚基基因表达促进Agrin诱导的AChR聚集；鉴定ATP刺激是否可以促进GABPα与AChR亚基基因的转录起始位点结合，采用ATP或无ATP处理C2C12肌管进行染色质免疫沉淀实验，检测转录因子GABPα与AChR亚基，AChRδ，AChRγ和AChRβ基因的启动子的结合丰度；经过荧光定量PCR扩增和DNA凝胶电泳，最终表明GABPα可以与AChR亚基的推定的起始位点结合；ATP刺激能促进GABPα与AChR亚基基因的启动子区域中的N-box的结合，增加AChR亚基数目和AChR聚集簇。

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权利要求：

百度查询： 浙江大学 CHCHD10在促进AChR亚基基因表达和维持NMJ稳定中的应用