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申请/专利权人：上海欧易生物医学科技有限公司
摘要：本发明公开了一种适用于Pacbio长读长测序的浒苔DNA的抽提纯化方法。本发明使用CTAB抽提浒苔基因组DNA结合磁珠纯化，所提取的DNA纯度高，OD260280达到1.8‑2.1，OD260230达到2.0‑2.3，所得DNAQubitNanodrop比值在0.5‑2。本发明所提取的DNA片段长度大于50kb，总量达到微克级别，能满足Pacbio三代长读长测序的要求。
主权项：1.一种适用于Pacbio三代长读长测序的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1提取大片段浒苔DNA1将CTAB裂解液和β-巯基乙醇加入离心管中，然后55-70℃预热；2将液氮研磨后的浒苔粉末倒入所述步骤1预热后的离心管中，迅速用手将管内液体摇匀；3向所述步骤2中加入蛋白酶K和RNA酶A，用手将管内液体摇匀，置于55-70℃恒温金属浴中温育30-90分钟；4冷却，然后加入预冷的体积比为25：24：1的酚：氯仿：异戊醇，用手摇匀后置于0-8℃放置1-15分钟；5离心取上清，然后在上清中加入体积比为24：1的氯仿：异戊醇，用手摇匀，置于0-8℃放置1-30分钟；6离心取上清，加入0.5-1倍上清体积的异丙醇，用手将离心管轻柔颠倒混匀，置于-20～-80℃冷冻10分钟-2小时；7离心，用70％的乙醇洗涤沉淀，然后离心，去除上清，得大片段浒苔DNA；待所述浒苔DNA干燥后，用洗脱缓冲液溶解所述浒苔DNA；2稀释DNA并用磁珠纯化DNA8向所述步骤7中浓度低于50ngμl的浒苔DNA中加入0.6×的纯化磁珠，室温静止10分钟；9然后置于磁力架上吸附5分钟，去掉上清，用70％乙醇洗涤10秒，去掉上清，洗涤2次，去掉残余酒精，从磁力架上取下离心管；10用洗脱缓冲液洗脱浒苔DNA，室温静置2分钟后，置于磁力架上吸附5分钟后，吸取上清置于新的离心管中，得到浒苔DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海欧易生物医学科技有限公司 一种适用于Pacbio三代长读长测序的高质量浒苔DNA的提取方法
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