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申请/专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所

摘要：本发明属于生物医药领域，具体涉及TBK1作为E3泛素连接酶的新用途。本发明发现TBK1TANK结合激酶1具有泛素化功能，不仅能够在体外发生泛素化，而且能在体内发生泛素化，是一种新的E3泛素连接酶；本发明也发现了TBK1能够降解包括口蹄疫病毒FMDV、肠道病毒EV71、脑心肌炎病毒EMCV以及塞内卡病毒SVV在内的小核糖核酸病毒科病毒的结构蛋白VP3，尤其能够特异性地降解FMDV的结构蛋白VP3，可用于制备降解口蹄疫病毒蛋白相关药物，阻止口蹄疫病毒蛋白组装相关药物以及预防或治疗口蹄疫病毒感染相关药物。

主权项：1.TBK1作为E3泛素连接酶的应用，其特征在于，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

全文数据：TBK1作为E3泛素连接酶的应用技术领域本发明属于生物医药领域，具体涉及TBK1作为E3泛素连接酶的应用。背景技术病毒是由一个核酸分子DNA或RNA与蛋白质构成的非细胞形态，由一个保护性外壳包裹一段DNA或者RNA，可以利用宿主的细胞系统进行自我复制。病毒可以感染几乎所有具有细胞结构的生命体，可以引发多种疾病。小核糖核酸RNA病毒科是由RNA病毒中最小的类群组成的一科，主要包括肠道病毒属、鼻病毒属、心病毒属以及口疮病毒属。其中口蹄疫属于口疮病毒属，是一种由口蹄疫病毒引起的重要的感染偶蹄动物的疾病，口蹄疫病毒FMDV是单股正链RNA病毒，基因组全长约8200bp，属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属。FMDV开放阅读框编码一个聚蛋白，翻译后由病毒编码的蛋白酶水解为四个结构蛋白VP1-VP4以及八个非结构蛋白L，2A，2B，2C，3A，3B，3C以及3D。目前疫苗接种是特异性预防口蹄疫FMD的有效手段，FMD弱毒疫苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性，在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用。但由于病毒毒力返强、病毒灭活不彻底、活病毒逃逸加工厂等不安全因素，世界上一些地区FMD的暴发似乎与灭活疫苗中残存的活病毒有关。因此，如何更好地抑制病毒蛋白的表达，是预防或控制病毒感染的一种有效途径。TANK结合激酶1TBK1是磷酸化IRF37的主要激酶，也是TLR和RLR介导的IFN-β表达中的关键激酶。本发明意外地发现，TBK1不仅能够作为一种新的E3泛素连接酶，而且能有效降解病毒VP3蛋白，进而显著抑制小核糖核酸病毒科，尤其是FMDV的蛋白组装。发明内容本发明的目的在于提供一种TBK1作为E3泛素连接酶的应用，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本发明的另一目的在于提供一种TBK1在制备降解病毒蛋白相关药物中的应用。本发明的另一目的在于提供一种TBK1在制备阻止病毒蛋白组装相关药物中的应用。本发明的另一目的在于提供一种TBK1在制备预防或治疗病毒感染相关药物中的应用。优选地，所述的病毒为小核糖核酸病毒科病毒。优选地，所述病毒为FMDV、EV71、EMCV、SVV的任一种病毒。优选地，所述病毒为FMDV。优选地，所述的病毒蛋白为结构蛋白。优选地，所述结构蛋白为VP3。优选地，所述TBK1加入药学上可接受的载体和或辅料，制成粉针剂、胶囊剂、片剂、混悬剂的任一种剂型。本发明的有益效果是：①本发明发现TBK1具有泛素化功能，不仅在体外发生泛素化，还可以在293T细胞中发生体内泛素化，是一种新的E3泛素连接酶；②TBK1能够降解多种小核糖核酸病毒科病毒的结构蛋白VP3，尤其是口蹄疫病毒FMDV、肠道病毒EV71、脑心肌炎病毒EMCV以及塞内卡病毒SVV，可作为病毒抑制剂应用；③TBK1能够降解多种小核糖核酸病毒科病毒的结构蛋白VP3，而对非结构蛋白3A不具有降解作用，具有特异性。附图说明图1TBK1体外泛素化分析图2TBK1体内泛素化分析图3TBK1降解VP3蛋白分析图4TBK1降解VP3蛋白的剂量依赖性分析图5WB检测TBK1--MEFs细胞中TBK1的表达情况图6FMDV感染TBK1--MEFs和TBK1++MEFs细胞的分析图7TBK1对FMDV、EV71、EMCV、SVV的结构蛋白VP3的影响图8不同生物体来源的TBK1基因中四个半胱氨酸保守序列比对分析图9TBK1基因的四个半光氨酸突变体对VP3蛋白降解的影响图10突变体TBK1C426605A对VP3蛋白降解的影响图11突变体TBK1C426605A对天然免疫的影响图12突变体TBK1C426605A的泛素化分析图13TBK1降解VP3蛋白的特异性分析具体实施方式下面通过具体实施例对本发明进行详细的阐述，但本发明的保护范围并不限于以下实施例，任何本领域的技术人员在本发明的基础上，结合本领域公知常识所能想到的技术方案，都属于本发明的保护范围。在本发明的下述实施例中，所用的实验材料和试剂来源入下：FMDV由中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫病毒参考实验室提供；pCDNA3.1-Flag-TBK1质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1质粒、pCDNA3.1质粒、MEF细胞、HEK-293T细胞、pCDNA3.1-HA-Ub质粒、pCDNA3.1-HA-VISA质粒、pCDNA3.1-HA-RIG-I质粒、pCDNA3.1-HA-IRF3-5D质粒、pCDNA3.1-HA-IRF7质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1质粒、pCDNA3.1-HA-MITA质粒、pCDNA3.1-HA-RIG-I质粒、pCDNA3.1-HA-MDA5质粒、pCDNA3.1-Flag-VP3质粒、pGL-U6-gRNA-TBK1质粒、pST1374-Cas9-D10A质粒、pCDNA3.1-Flag-3A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C423A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C426A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C471A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C605质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C426605A质粒、pCDNA3.1-Flag-TBK1C426605A质粒、pCDNA3.1-FMDV-Myc-VP3质粒、pCDNA3.1-EV71-Myc-VP3质粒、pCDNA3.1-EMCV-Myc-VP3质粒、pCDNA3.1-SVV-Myc-VP3质粒均购买于兰州瑞博莱生物科技有限公司。实施例1TBK1作为E3泛素连接酶的活性研究1.1TBK1体外泛素化实验1.1.1质粒的体外转录1根据体外转录试剂盒TNTQuickCoupledTranscriptionTranslationSystemskit说明，将待检测pCDNA3.1-Flag-TBK1质粒1μg和对照质粒pCDNA3.11μg分别用与TNTQuickMasterMix24μL，Methionine1.2μL，0.5μgμLplasmid2μL，H2O2.8μL混合制备成反应物；2将上述反应物置于30℃条件下反应60-90min，获得体外转录产物pCDNA3.1-Flag-TBK1蛋白。1.1.2泛素化分析实验：1根据体外泛素试剂盒EnzoLifeSciences说明书，将上述体外转录产物pCDNA3.1-Flag-TBK1蛋白7.5μL与dH2O14μL，10×UbiquitionylationBuffer5μL，100UmlIPP10μL，50mMDTT1μL，0.1MMg-ATP2.5μL，Reticulocytecelllysate7.5μL，pCDNA3.1-Flag-TBK1，50mM20×Bio-Ub2.5μL均匀混合制备成反应物；2将上述反应物置于37℃下反应30-60min，用HRP-streptavidin进行WesternBlot检测。1.1.3实验结果实验结果如图1所示，TBK1与Bio-ub结合，发生了体外泛素化。1.2TBK1质粒的体内泛素化实验1.2.1实验步骤1HEK-293T细胞1×107铺12孔板，当其密度达到40％-60％时，转染pCDNA3.1-Flag-TBK10μg，5μg，10μg和pCDNA3.1-HA-Ub质粒2μg；2转染24h后，用100μL含1％SDS的细胞裂解液20mMTris、150mMNaCl、10μgmLleupeptin、1％Triton、10μgmLaprotinin、1mMEDTA、1mMphenylMethylsulfonylfluoride、pH7.5振荡；3震荡结束后在95℃下加热10min，并将900μL不含SDS的裂解液加入其中，4℃12000rpm离心10min，取上清100μL备用，余下上清加入flag抗体与proteinG磁珠。4将样品放在静音混合器4℃上孵育4h。5用细胞裂解液含0.5MNaCl洗三次proteinG磁珠，每次1ml，用以洗去非特异性结合的蛋白。然后加上2×SDS聚丙烯酰氨凝胶样品缓冲液60μl，95℃煮5-10min，13000rpm离心1min待检测。6取步骤3中备用的100μL上清，加6×SDS聚丙烯酰氨凝胶上样缓冲液20μl，95℃煮5min，用以检测外源性蛋白的表达情况。1.2.2实验结果实验结果如图2所示，TBK1与HA-Ub结合，在HEK-293T细胞中发生了泛素化，随着TBK1浓度的增加，检测到的体内泛素化水平逐渐增加，表明TBK1能在体内发生泛素化。综上实验表明，TBK1具有泛素化功能，是一种新的E3泛素连接酶。实施例2降解FMDV结构蛋白VP3的信号通路分子分析2.1实验步骤1HEK-293T细胞铺12孔板，待细胞长至60％-80％时，将信号通路分子的质粒pCDNA3.1-HA-VISA，pCDNA3.1-HA-RIG-I，pCDNA3.1-HA-IRF3-5D，pCDNA3.1-HA-IRF7，pCDNA3.1-HA-TBK1，pCDNA3.1-HA-MITA，pCDNA3.1-HA-RIG-I，pCDNA3.1-HA-MDA5各1μg，分别与FMDV的VP3质粒1μg共转染到293T细胞中；2转染24h后收样，用冷却的PBS洗1-2遍，加入100μL的SDSloadingbuffer进行裂解，WB方法检测VP3蛋白的表达情况。2.2实验结果结果如图3所示，只有在TBK1质粒存在的情况下，VP3蛋白没有表达，因此，上述信号通路分子中只有TBK1能够抑制VP3蛋白的表达，说明TBK1能够降解FMDV的VP3蛋白。实施例3TBK1降解FMDV结构蛋白VP3的分析3.1实验步骤1HEK-293T细胞铺12孔板，细胞长至60％-80％时，转染pCDNA3.1-Flag-VP3质粒以及pCDNA3.1-HA-TBK1质粒，其中分别以pCDNA3.1-Flag-VP3质粒1μg恒量，pCDNA3.1-HA-TBK1质粒为0.5μg、1μg、1.5μg、2μg变量递增，或者pCDNA3.1-HA-TBK1质粒2μg恒量，pCDNA3.1-Flag-VP3质粒0.5μg、1μg、1.5μg、2μg变量递增进行共转染；2转染24h后收样，用冷却的PBS洗1-2遍，加入100μL的SDSloadingbuffer裂解，WB检测pCDNA3.1-Flag-VP3质粒以及pCDNA3.1-HA-TBK1质粒的表达情况。3.2实验结果结果如图4所示：不管是在pCDNA3.1-Flag-VP3质粒含量不变，pCDNA3.1-HA-TBK1质粒变量递增的情况下，还是pCDNA3.1-HA-TBK1质粒含量不变，pCDNA3.1-Flag-VP3质粒变量递增的情况下，TBK1都能够降解VP3蛋白，并且TBK1的过度表达以剂量依赖性的方式降解了VP3蛋白。实施例4敲除TBK1基因对VP3蛋白降解的影响4.1TBK1--MEFs细胞系的构建4.1.1实验步骤1退火偶联，将浓度为10μM的CRISPRCas9FCGGCGAGTCAACTCCGGCCA和RTGGCCGGAGTTGACTCGCCG引导序列5μL，与0.5MNaCl6μL以及水24μL混合，将退火后的引物置于95℃水浴锅中5min，然后拿出自然降温至室温；2按照说明书，用FastDigestBsmBI将pGL-U6-gRNA载体切出粘性末端；将5μL退火后的上述引物与2μL酶切载体用T4连接酶混合，室温连接30min；3取5μL连接产物与50μL感受态DH5α混合，热激30秒，涂板；4挑单克隆，测序，提质粒，得到的重组质粒记为pGL-U6-gRNA-TBK1；5将MEF细胞接种至10cm皿，用8mLDMEM培养基培养过夜密度约70-80％，并用脂质体2000转染pGL-U6-gRNA-TBK1质粒和pST1374-Cas9-D10A质粒质粒比为1:1；6转染24h后加入Puromycin培养基筛选，筛选时间为7天；7换为正常的DMEM培养基，从转染后的MEF细胞中获取TBK1基因敲除的MEF细胞系TBK1--MEFs；8通过WesternBlot检测TBK1--MEFs细胞中TBK1的表达情况。4.1.2实验结果结果如图5所示，WB检测表明，TBK1--MEFs细胞中，TBK1没有表达，说明TBK1--MEFs细胞构建成功。4.2FMDV感染TBK1--MEFs细胞4.2.1实验步骤1TBK1++MEFs细胞没有敲除TBK1的野生型MEF细胞和TBK1--MEFs细胞敲除TBK1的MEF细胞铺于12孔板，12h后接FMDVMOI＝0.1，分别在12h和16h收集样品，进行绝对定量Q-PCR实验，检测FMDV基因的拷贝数。2在步骤1的样品中加入TRIZOL试剂500μL裂解5min，再加入氯仿100μL混匀，室温放置10min后，在4℃，12000rpm离心15min，取上清；3取步骤2中的上清200μL到1.5mlEP管中，并加入异丙醇200μL混匀，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min；4去上清后加入1ml75％乙醇，4℃12000rpm离心5min，去上清干燥并加入DEPC水溶解。4.2.2Q-PCR反应体系反应试剂：2×onestepRT-PCRbufferⅢ12.5ml，TakaraExTaqHS0.5ml，PrimerScripRTEnzymemixⅡ0.5μL，正向引物5’ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA-3C，0.5μL，反向引物5’GCGAGTCCTGCCACGGA-3C，0.5μL，探针5FAM-TCCTTTGCACGCCGTGGGAC-TAMRA--3A，1μL，RNA2μL，H2O7.5μL；反应条件：42℃，15min；95℃，10s；55℃，30s；72℃，30s；2-4共40个循环。4.2.3实验结果实验结果如图6所示，不管是在FMDV感染MEF细胞后12h还是16h后，TBK1--MEFs细胞中FMDV基因拷贝数均显著高于TBK1++MEFs细胞，由此说明，敲除TBK1基因后，FMDV感染MEF细胞的能力显著增强。实施例5TBK1对其它小RNA病毒科VP3蛋白降解5.1实验步骤1293T细胞铺于12孔板，12h后分别共转染pCDNA3.1载体上带HA标签的TBK1质粒pCDNA3.1-HA-TBK1，0μg，0.25μg，0.5μg和pCDNA3.1载体上带Myc标签的FMDV、EV71、EMCV以及SVV的VP3结构蛋白质粒pCDNA3.1-FMDV-Myc-VP3，pCDNA3.1-EV71-Myc-VP3，pCDNA3.1-EMCV-Myc-VP3和pCDNA3.1-SVV-Myc-VP3，各1μg；2转染24h后，用SDS-loadingbuffer裂解，WB检测TBK1和VP3的表达。5.2实验结果结果如图7所示，随着TBK1含量的增加，FMDV、EV71、EMCV、SVV结构蛋白VP3的表达显著降低或者抑制，说明TBK1对小核糖核酸病毒科FMDV、EV71、EMCV、SVV的结构蛋白VP3均有降解作用。实施例6TBK1降解VP3蛋白的泛素化位点分析6.1TBK1中四种保守半胱氨酸的序列分析将人、小鼠、牛、猴、猪、大鼠六种不同生物体来源的TBK1半胱氨酸保守序列进行比对，分析鉴定了TBK1中的四个保守半胱氨酸C423、C426、C471和C605，其序列如图8所示。6.2TBK1降解VP3蛋白的位点分析1将上述四种半胱氨酸C423、C426、C471和C605分别突变为丙氨酸，构建TBK1突变体TBK1C423A、TBK1C426A、TBK1C471A、TBK1C605，由兰州瑞博莱生物科技有限公司构建，并获得pCDNA3.1-HA-TBK1C423A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C426A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C471A质粒、pCDNA3.1-HA-TBK1C605质粒，通过转染实验，检测TBK1四种突变体对FMDV结构蛋白VP3的影响。结果如图9所示，将C423、和C471位点处的半胱氨酸突变为丙氨酸时产生的TBK1突变体TBK1C423A和TBK1C471A仍然能够降解FMDV的VP3结构蛋白，说明C423、和C471并不是降解FMDV的VP3结构蛋白的位点；而将C426和C605突变为丙氨酸时产生TBK1突变体TBK1C426A和TBK1C605后，不会降解FMDV结构蛋白VP3，说明C426和C605是降解FMDV结构蛋白VP3的位点。2将C426和C605半胱氨酸同时突变为丙氨酸，得到突变体TBK1C426605A，并构建pCDNA3.1-HA-TBK1C426605A质粒，检测TBK1C426605A突变体对FMDV结构蛋白VP3降解的影响。实验结果如图10显示，将C426和C605位点处的半胱氨酸同时突变为丙氨酸，得到突变体TBK1C426605A对FMDV结构蛋白VP3的表达没有影响。上述实验表明C426和C605位点处的半胱氨酸分别或同时突变为丙氨酸后，都不会再降解FMDV的结构蛋白VP3，再次证明了C426和C605是TBK1降解FMDV的结构蛋白VP3的关键位点。6.3TBK1C426605A突变体对其天然免疫活性的影响将TBK1的C426和C605半胱氨酸同时突变为丙氨酸，以评估其在TBK1激活中的作用。结果如图11所示，突变体TBK1C426605A对TBK1介导的IRF3磷酸化和TBK1的自磷酸化没有影响。说明，TBK1通过C426和C605位点降解VP3蛋过程与其天然免疫活性无关。6.4TBK1C426605A突变体体外泛素化分析1根据实施例1中质粒的体外转录操作过程，将pCDNA3.1-Flag-TBK1、pCDNA3.1-Flag-TBK1C426605A、以及空载pCDNA3.1质粒各1μg，进行体外转录。2根据实施例1中的体外泛素化分析步骤，对步骤1中体外转录的产物进行体外泛素化分析。3实验结果如图12所示，将TBK1的C426和C605位点的半胱氨酸同时突变为丙氨酸得到的突变体TBK1C426605A的体外泛素化现象消失。说明，TBK1的C426和C605位点是通过泛素化作用来降解FMDV结构蛋白VP3的关键位点。实施例7TBK1降解FMDV的VP3蛋白的特异性分析7.1实验步骤1293T细胞铺12孔板，细胞长至60％-80％时，TBK1质粒0.25μg分别共转染pCDNA3.1-Flag-VP3质粒1μg和pCDNA3.1-Flag-3A质粒1μg；2转染24h后收样，用冷却的PBS洗1-2遍，加入SDSloadingbuffer100μL裂解；3WB检测TBK1质粒，VP3蛋白以及3A质粒的表达情况。7.2实验结果结果如图13所示，TBK1质粒能够降解FMDV的结构蛋白VP3，但对非结构蛋白3A无影响。说明TBK1质粒能够特异性降解FMDV的结构蛋白VP3。序列表中国农业科学院兰州兽医研究所TBK1作为E3泛素连接酶的应用2SIPOSequenceListing1.012190DNA人Homosapiens1atgcagagcacttctaatcatctgtggcttttatctgatattttaggccaaggagctact60gcaaatgtctttcgtggaagacataagaaaactggtgatttatttgctatcaaagtattt120aataacataagcttccttcgtccagtggatgttcaaatgagagaatttgaagtgttgaaa180aaactcaatcacaaaaatattgtcaaattatttgctattgaagaggagacaacaacaaga240cataaagtacttattatggaattttgtccatgtgggagtttatacactgttttagaagaa300ccttctaatgcctatggactaccagaatctgaattcttaattgttttgcgagatgtggtg360ggtggaatgaatcatctacgagagaatggtatagtgcaccgtgatatcaagccaggaaat420atcatgcgtgttataggggaagatggacagtctgtgtacaaactcacagattttggtgca480gctagagaattagaagatgatgagcagtttgtttctctgtatggcacagaagaatatttg540caccctgatatgtatgagagagcagtgctaagaaaagatcatcagaagaaatatggagca600acagttgatctttggagcattggggtaacattttaccatgcagctactggatcactgcca660tttagaccctttgaagggcctcgtaggaataaagaagtgatgtataaaataattacagga720aagccttctggtgcaatatctggagtacagaaagcagaaaatggaccaattgactggagt780ggagacatgcctgtttcttgcagtctttctcggggtcttcaggttctacttacccctgtt840cttgcaaacatccttgaagcagatcaggaaaagtgttggggttttgaccagttttttgca900gaaactagtgatatacttcaccgaatggtaattcatgttttttcgctacaacaaatgaca960gctcataagatttatattcatagctataatactgctactatatttcatgaactggtatat1020aaacaaaccaaaattatttcttcaaatcaagaacttatctacgaagggcgacgcttagtc1080ttagaacctggaaggctggcacaacatttccctaaaactactgaggaaaaccctatattt1140gtagtaagccgggaacctctgaataccataggattaatatatgaaaaaatttccctccct1200aaagtacatccacgttatgatttagacggggatgctagcatggctaaggcaataacaggg1260gttgtgtgttatgcctgcagaattgccagtaccttactgctttatcaggaattaatgcga1320aaggggatacgatggctgattgaattaattaaagatgattacaatgaaactgttcacaaa1380aagacagaagttgtgatcacattggatttctgtatcagaaacattgaaaaaactgtgaaa1440gtatatgaaaagttgatgaagatcaacctggaagcggcagagttaggtgaaatttcagac1500atacacaccaaattgttgagactttccagttctcagggaacaatagaaaccagtcttcag1560gatatcgacagcagattatctccaggtggatcactggcagacgcatgggcacatcaagaa1620ggcactcatccgaaagacagaaatgtagaaaaactacaagtcctgttaaattgcatgaca1680gagatttactatcagttcaaaaaagacaaagcagaacgtagattagcttataatgaagaa1740caaatccacaaatttgataagcaaaaactgtattaccatgccacaaaagctatgacgcac1800tttacagatgaatgtgttaaaaagtatgaggcatttttgaataagtcagaagaatggata1860agaaagatgcttcatcttaggaaacagttattatcgctgactaatcagtgttttgatatt1920gaagaagaagtatcaaaatatcaagaatatactaatgagttacaagaaactctgcctcag1980aaaatgtttacagcttccagtggaatcaaacataccatgaccccaatttatccaagttct2040aacacattagtagaaatgactcttggtatgaagaaattaaaggaagagatggaaggggtg2100gttaaagaacttgctgaaaataaccacattttagaaaggtttggctctttaaccatggat2160ggtggccttcgcaacgttgactgtctttag21902729PRT人Homosapiens2MetGlnSerThrSerAsnHisLeuTrpLeuLeuSerAspIleLeuGly151015GlnGlyAlaThrAlaAsnValPheArgGlyArgHisLysLysThrGly202530AspLeuPheAlaIleLysValPheAsnAsnIleSerPheLeuArgPro354045ValAspValGlnMetArgGluPheGluValLeuLysLysLeuAsnHis505560LysAsnIleValLysLeuPheAlaIleGluGluGluThrThrThrArg65707580HisLysValLeuIleMetGluPheCysProCysGlySerLeuTyrThr859095ValLeuGluGluProSerAsnAlaTyrGlyLeuProGluSerGluPhe100105110LeuIleValLeuArgAspValValGlyGlyMetAsnHisLeuArgGlu115120125AsnGlyIleValHisArgAspIleLysProGlyAsnIleMetArgVal130135140IleGlyGluAspGlyGlnSerValTyrLysLeuThrAspPheGlyAla145150155160AlaArgGluLeuGluAspAspGluGlnPheValSerLeuTyrGlyThr165170175GluGluTyrLeuHisProAspMetTyrGluArgAlaValLeuArgLys180185190AspHisGlnLysLysTyrGlyAlaThrValAspLeuTrpSerIleGly195200205ValThrPheTyrHisAlaAlaThrGlySerLeuProPheArgProPhe210215220GluGlyProArgArgAsnLysGluValMetTyrLysIleIleThrGly225230235240LysProSerGlyAlaIleSerGlyValGlnLysAlaGluAsnGlyPro245250255IleAspTrpSerGlyAspMetProValSerCysSerLeuSerArgGly260265270LeuGlnValLeuLeuThrProValLeuAlaAsnIleLeuGluAlaAsp275280285GlnGluLysCysTrpGlyPheAspGlnPhePheAlaGluThrSerAsp290295300IleLeuHisArgMetValIleHisValPheSerLeuGlnGlnMetThr305310315320AlaHisLysIleTyrIleHisSerTyrAsnThrAlaThrIlePheHis325330335GluLeuValTyrLysGlnThrLysIleIleSerSerAsnGlnGluLeu340345350IleTyrGluGlyArgArgLeuValLeuGluProGlyArgLeuAlaGln355360365HisPheProLysThrThrGluGluAsnProIlePheValValSerArg370375380GluProLeuAsnThrIleGlyLeuIleTyrGluLysIleSerLeuPro385390395400LysValHisProArgTyrAspLeuAspGlyAspAlaSerMetAlaLys405410415AlaIleThrGlyValValCysTyrAlaCysArgIleAlaSerThrLeu420425430LeuLeuTyrGlnGluLeuMetArgLysGlyIleArgTrpLeuIleGlu435440445LeuIleLysAspAspTyrAsnGluThrValHisLysLysThrGluVal450455460ValIleThrLeuAspPheCysIleArgAsnIleGluLysThrValLys465470475480ValTyrGluLysLeuMetLysIleAsnLeuGluAlaAlaGluLeuGly485490495GluIleSerAspIleHisThrLysLeuLeuArgLeuSerSerSerGln500505510GlyThrIleGluThrSerLeuGlnAspIleAspSerArgLeuSerPro515520525GlyGlySerLeuAlaAspAlaTrpAlaHisGlnGluGlyThrHisPro530535540LysAspArgAsnValGluLysLeuGlnValLeuLeuAsnCysMetThr545550555560GluIleTyrTyrGlnPheLysLysAspLysAlaGluArgArgLeuAla565570575TyrAsnGluGluGlnIleHisLysPheAspLysGlnLysLeuTyrTyr580585590HisAlaThrLysAlaMetThrHisPheThrAspGluCysValLysLys595600605TyrGluAlaPheLeuAsnLysSerGluGluTrpIleArgLysMetLeu610615620HisLeuArgLysGlnLeuLeuSerLeuThrAsnGlnCysPheAspIle625630635640GluGluGluValSerLysTyrGlnGluTyrThrAsnGluLeuGlnGlu645650655ThrLeuProGlnLysMetPheThrAlaSerSerGlyIleLysHisThr660665670MetThrProIleTyrProSerSerAsnThrLeuValGluMetThrLeu675680685GlyMetLysLysLeuLysGluGluMetGluGlyValValLysGluLeu690695700AlaGluAsnAsnHisIleLeuGluArgPheGlySerLeuThrMetAsp705710715720GlyGlyLeuArgAsnValAspCysLeu725

权利要求：1.TBK1作为E3泛素连接酶的应用，其特征在于，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.TBK1在制备降解病毒蛋白相关药物中的应用，其特征在于，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.TBK1在制备阻止病毒蛋白组装相关药物中的应用，其特征在于，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。4.TBK1在制备预防或治疗病毒感染相关药物中的应用，其特征在于，所述TBK1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述TBK1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。5.如权利要求2-4所述的任一应用，其特征在于，所述的病毒为小核糖核酸病毒科病毒。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的病毒为FMDV、EV71、EMCV、SVV中的任一种。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的病毒为FMDV。8.如权利要求2-3所述的应用，其特征在于，所述的病毒蛋白为结构蛋白。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的病毒蛋白为VP3。10.如权利要求2-4所述的任一种应用，其特征在于，所述的TBK1加入药学上可接受的载体和或辅料，制成粉针剂、胶囊剂、片剂、混悬剂的任一种剂型。

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