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申请/专利权人：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）;广州杰尔克生物技术有限公司

摘要：本发明公开了基因HES2在食管鳞癌辅助诊断、预后判断和治疗中的应用。本发明发现HES2基因高表达于食管鳞癌组织。进一步实验发现HES2基因的mRNA在食管鳞癌细胞系高表达，HES2高表达者肿瘤进展更快且更倾向于发生淋巴结或远处器管转移，与较差的5年无病生存率和5年总体生存率显著相关。另外还设计针对HES2基因的反义寡核苷酸链序列，沉默HES2表达，可用于食管癌的治疗。说明HES2可作为食管鳞癌辅助诊断及预测食管鳞癌复发趋势的检测标志物，以及治疗的靶点。

主权项：1.定量检测HES2的试剂在制备食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断产品中的应用。

全文数据：基因HES2在食管鳞癌辅助诊断、预后判断和治疗中的应用技术领域本发明涉及分子生物学和肿瘤药物领域，具体涉及一种食管鳞状细胞癌标志物HES2及其在食管鳞状细胞癌辅助诊断、治疗和预后判断中的应用。背景技术食管癌是常见的恶性肿瘤，据2012年全球肿瘤统计，全世界估计有45.58万新的食管癌病例。我国是世界上食管癌高发地区之一，发病率约占全球50％，每年平均病死约15万人。食管癌的发病率和死亡率各国差异很大，全世界每年约有30万人死于食管癌。我国已成为全球患食管癌死亡率最高的国家。大约有一半被诊断患有食管癌的病例存在不能切除或转移的肿瘤。大部分患者在发现时已发展到局部晚期30％或晚期40％。这两组患者的5年生存率为39％和4％。食管癌主要有鳞状细胞癌和腺癌两种类型，其中鳞癌最为常见，约占全球食管癌的90％。为了更高效地识别高危肿瘤和更准确地预测高危肿瘤的发展趋势，发现并合理应用肿瘤标志物是肿瘤检测和复发预测的前提。目前，预测早期复发以及预后不佳的食管癌的标志物尚不成熟，而且帮助新发病例了解疾病进展风险和指导治疗的工具也十分有限。因此，食管癌复发标志物的研究己成为迫切需要解决的重大科研问题。HES家族基因是再生医学和肿瘤学领域的药物基因组靶标。HES2是HES家族bHLH转录因子2，其基因位于人类基因组序列AL031848.il中，编码173-aa蛋白。有研究表明，HES2可与转录起始复合物相互作用并抑制其功能，可能参与各种基因的调控，并可能在细胞分化中起作用。另外，HES2mRNA在胎盘，胰腺癌，RER结肠癌，宫颈癌和头颈部肿瘤中表达。反基因治疗anti-genetherapy是由特定寡聚脱氧核苷酸与靶双链DNA同聚嘧啶或同聚嘌呤区专一性结合形成局部三螺旋结构，通过阻止靶DNA与聚合酶、转录因子等蛋白结合而实现抑制靶基因的复制和表达的目的。反义寡核苷酸AON是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达,在基因水平调控的分子药物。目前比较理想的反义物质——锁核酸lockmucleicacid,LNA是一种特殊的双环状核苷酸衍生物，与其他寡核苷酸相比，具有热稳定性更高、分子杂交能力更好、抗核酸酶降解能力更强、脂溶性更好和细胞毒性更低等优势。发明内容本发明的目的在于提供一种用于食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断的产品。本发明的另一目的在于提供一种治疗食管鳞癌的药剂。本发明所采取的技术方案是：定量检测HES2的试剂在制备食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断产品中的应用。进一步的，所述定量检测HES2的试剂选自定量检测HES2的RNA转录水平的试剂、定量检测HES2的蛋白表达水平的试剂中的至少一种。进一步的，所述定量检测HES2的RNA转录水平的试剂选自定量检测HES2的引物或探针。进一步的，所述定量检测HES2的引物为：上游引物：5'-AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTA-3'SEQIDNO:1；下游引物：5'-TGCAGGAAGCGCACGGTCATTT-3'SEQIDNO:2。进一步的，所述产品为试剂盒或芯片。抑制HES2表达的试剂在制备治疗或辅助治疗食管鳞癌产品中的应用。进一步的，所述抑制HES2表达的试剂选自沉默HES2表达的siRNA、沉默HES2表达的shRNA、沉默HES2表达的反义寡核苷酸链中的至少一种。进一步的，所述沉默HES2表达的siRNA或者shRNA的靶向序列选自以下至少一种：5'-CTGGAGCACCTGTGGCGGAG-3'SEQIDNO：5；5'-GCCTTGCGACAGCTACCGCG-3'SEQIDNO：6。进一步的，所述沉默HES2表达的反义寡核苷酸链选自以下至少一种：HES2-AON#1：5'-GCTCACTAGTCCACTA-3'SEQIDNO：7；HES2-AON#2：5'-GCTGGTTAGATCTTAC-3'SEQIDNO：8；HES2-AON#3：5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9；HES2-AON#5：5'-TCCAGAGTCAAGCAAG-3'SEQIDNO：11。进一步的，所述产品为药剂或保健品。本发明的有益效果是：发明人通过利用多个食管癌及正常食管组织的mRNA表达谱芯片进行整合分析，发现HES2基因高表达于食管鳞癌组织。进一步的实验发现HES2基因的mRNA在食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706、HKESC1、Kyse410、Kyse520中高表达，而其他食管癌细胞系相对表达较低。发明人进一步设计并合成能检测HES2基因RNA表达水平的荧光定量PCR引物及探针序列用于食管鳞癌的诊断；还设计并制定了免疫标记食管鳞癌中HES2蛋白的评分标准，通过免疫组织化学的方法，识别并预测食管鳞癌的恶性程度及发展趋势。发明人还设计针对HES2基因的反义寡核苷酸链AON序列，并针对AON序列中脱氧核酸进行硫代磷酸修饰设计，通过化学合成得到针对HES2的一条AON序列HES2-AON#3。本发明提供的免疫标记HES2蛋白的评分标准和针对HES2的一条AON序列可用于食管癌的预后判断和治疗。附图说明图1、HES2基因mRNA高表达于食管鳞癌组织。A临床组织样品的芯片数据中，肿瘤组织的HES2基因RNA水平高于正常食管组织；B在配对的癌组织与癌旁组织中检测HES2的表达情况。定量PCR结果显示，HES2在食管鳞癌中的表达水平相比配对的癌旁组织，其上调的倍数要比食管腺癌上调的倍数改变更加明显；C相对于非恶性的食管上皮细胞NEEC-1、NEEC-2，HES2基因在多个食管鳞癌细胞系中高表达；图中ESCC表示食管鳞癌，EAC表示食管腺癌。图2、HES2基因蛋白高表达于食管癌组织并与差的预后相关。A相对于食管腺癌41.31％，HES2染色中-强度在食管鳞癌87.62％中比例明显升高；B按我们拟定的免疫组化评分标准SI评分把HES2在食管鳞癌中的表达水平分成2组，0-4分为低表达组HES2-L，6-12分为高表达组HES2-H；CHES2基因的高表达预示着更短的总体生存时间和无病生存时间。图3、利用小发夹RNA稳定沉默HES2能抑制食管癌的恶性表型。A、B沉默HES2shHes2#1、shHes2#2能显著抑制食管鳞癌细胞的增殖能力；C沉默HES2shHes2#1、shHes2#2能抑制食管鳞癌细胞的迁移能力；D沉默HES2shHes2#1、shHes2#2能抑制食管癌细胞的侵袭能力。图4、利用靶向HES2的AON能抑制食管癌的恶性表型。A、B实时荧光定量分析和免疫印迹实验，确认该段AON能有效沉默食管鳞癌细胞中HES2的表达；C对小鼠分别皮下注射对照组细胞Eca109和沉默HES2的细胞Eca109HES2-AON#3，结果表明：沉默HES2能抑制食管鳞癌细胞的体内形成肿瘤的大小；D对小鼠分别尾静脉注射对照组细胞Eca109Vector和沉默HES2的细胞Eca109HES2-AON#3，结果表明：沉默HES2能抑制食管鳞癌细胞的肺转移能力。具体实施方式定量检测HES2的试剂在制备食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断产品中的应用。优选的，所述定量检测HES2的试剂选自定量检测HES2的RNA转录水平的试剂、定量检测HES2的蛋白表达水平的试剂中的至少一种。优选的，所述定量检测HES2的RNA转录水平的试剂选自定量检测HES2的引物或探针。根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述定量检测HES2的引物为：上游引物：5'-AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTA-3'SEQIDNO:1；下游引物：5'-TGCAGGAAGCGCACGGTCATTT-3'SEQIDNO:2。优选的，所述产品为试剂盒或芯片。抑制HES2表达的试剂在制备治疗或辅助治疗食管鳞癌产品中的应用。优选的，所述抑制HES2表达的试剂选自抑制HES2RNA转录的试剂、或抑制HES2蛋白表达的试剂中的至少一种。优选的，所述抑制HES2表达的试剂选自沉默HES2表达的shRNA、沉默HES2表达的反义寡核苷酸链中的至少一种。优选的，所述沉默HES2表达的siRNA或者shRNA的靶向序列选自以下至少一种：5'-CTGGAGCACCTGTGGCGGAG-3'SEQIDNO：5；5'-GCCTTGCGACAGCTACCGCG-3'SEQIDNO：6。优选的，所述沉默HES2表达的反义寡核苷酸链选自以下至少一种：HES2-AON#1：5'-GCTCACTAGTCCACTA-3'SEQIDNO：7；HES2-AON#2：5'-GCTGGTTAGATCTTAC-3'SEQIDNO：8；HES2-AON#3：5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9；HES2-AON#5：5'-TCCAGAGTCAAGCAAG-3'SEQIDNO：11。一种用于食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断的产品，所述产品中含有定量检测HES2的试剂。优选的，所述定量检测HES2的试剂选自定量检测HES2的RNA转录水平的试剂、定量检测HES2的蛋白表达水平的试剂中的至少一种。优选的，所述定量检测HES2的RNA转录水平的试剂选自定量检测HES2的引物或探针。优选的，所述定量检测HES2的引物为：上游引物：5'-AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTA-3'SEQIDNO:1；下游引物：5'-TGCAGGAAGCGCACGGTCATTT-3'SEQIDNO:2。优选的，所述产品为试剂盒或芯片。优选的，所述药剂中含有抑制HES2表达的试剂。优选的，所述抑制HES2表达的试剂选自抑制HES2RNA转录的试剂、或抑制HES2蛋白表达的试剂中的至少一种。优选的，所述抑制HES2表达的试剂选自沉默HES2表达的shRNA、沉默HES2表达的反义寡核苷酸链中的至少一种。优选的，所述沉默HES2表达的siRNA或者shRNA的靶向序列选自以下至少一种：5'-CTGGAGCACCTGTGGCGGAG-3'SEQIDNO：5；5'-GCCTTGCGACAGCTACCGCG-3'SEQIDNO：6。优选的，所述沉默HES2表达的反义寡核苷酸链选自以下至少一种：HES2-AON#1：5'-GCTCACTAGTCCACTA-3'SEQIDNO：7；HES2-AON#2：5'-GCTGGTTAGATCTTAC-3'SEQIDNO：8；HES2-AON#3：5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9；HES2-AON#5：5'-TCCAGAGTCAAGCAAG-3'SEQIDNO：11。下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。本发明提供了一种用于食管鳞癌辅助诊断和预后判断的靶基因HES2。利用生物信息学的方法分析食管癌基因表达高通量数据，体外实验荧光定量PCR、免疫组化、克隆形成结果表明HES2在食管鳞癌组织中高表达且生存分析表明HES2基因的表达水平与食管鳞癌的增殖和预后密切相关，这与小鼠体内实验结果是一致的。本发明公开了免疫标记食管鳞癌中HES2蛋白的评分标准和针对HES2基因的反义寡核苷酸链AON序列，可用于辅助诊断食管鳞癌、治疗及预测食管鳞癌的复发趋势。例如，HES2高表达者肿瘤进展更快且更倾向于发生淋巴结或远处器管转移以及其5年无病生存率和5年总体生存率均呈明显下降趋势。2设计并制定了免疫标记食管鳞癌中HES2蛋白的评分标准表1，通过免疫组织化学的方法，识别并预测食管鳞癌的恶性程度及发展趋势。3设计针对HES2基因的锁核酸修饰的反义寡核苷酸链AntisenseOligonucleotide，AON，通过实验从5个不同的AON中验证获得最有效下调HES2表达的AON靶向序列HES2-AON#3，其序列为5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9。实施例1：HES2在食管鳞癌中表达上调1TCGA数据库分析方法：为了探讨HES2在食管癌中的表达情况，应用生物学分析方法分析TheCancerGenomeAtlasTCGA数据库中相关食管癌中Normal和Tumor中mRNA表达数据，并进行预后分析。结果图1A：食管鳞癌组织的HES2基因RNA水平高于正常食管组织和食管腺癌组织。2qRT-PCR检测食管鳞癌组织以及配对癌旁组织中HES2基因的mRNA水平通过上述分析获知HES2在食管鳞癌中mRNA水平高表达，本发明进一步对食管鳞癌组织以及配对癌旁组织中的HES2进行qRT-PCR检测验证。方法：1食管癌组织来源：我们从中山大学肿瘤防治中心n＝30收集食管癌患者的组织样本；2细胞系和细胞培养：人正常食管上皮细胞NEEC-1、NEEC-2，以及12株食管癌细胞系：OE19、OE33、Kyse30、Kyse140、Kyse510、TE-1、Kyse410、EC18、Eca109、EC9706、Kyse520、HKESC1。将细胞培养于含有10％FBS的DMEMDulbecco'sMinimumEssentialMedium,Invitrogen,Carlsbad,USA培养基中，放置37℃的5％CO2培养箱。3实时荧光定量PCR：收集上述组织和12种细胞，分别利用Trizol提取RNA，使用MMLV反转录酶Promega进行反转录合成cDNA，使用2XSYBRmixRoche对各组细胞中HES2的表达水平进行qRT-PCR检测。以GAPDH做内参。所用q-PCR引物为：HES2-QF:AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTASEQIDNO:1HES2-QR:TGCAGGAAGCGCACGGTCATTTSEQIDNO:2GAPDH-QF:GCACCGTCAAGGCTGAGAACSEQIDNO:3GAPDH-QR:TGGTGAAGACGCCAGTGGASEQIDNO:4将每个样本获得的HES2基因的Ct值减去其内参基因GAPDH的Ct值得到△Ct，结果用△Ct表示，△Ct值越高，表示该基因的表达水平越低。结果：定量PCR结果图1B、C显示，肿瘤组织的HES2基因表达高于癌旁组织；相对于非恶性的食管上皮细胞NEEC-1、NEEC-2，HES2基因在多个食管癌细胞系中高表达。3免疫组化法检测HES2基因蛋白在食管癌组织切片中的表达水平对选取的361例包括食管腺癌组织食管癌组织切片，使用HES2抗体进行免疫组化染色。我们的免疫组化方法为：1烤片60℃，1h30min；2脱蜡及复水：二甲苯三缸，5min次；100％乙醇两次，95％乙醇一次，75％乙醇一次，蒸馏水洗两次，每次各3min；3EDTA修复液，高压修复，冒气后3min；4切片在修复液中自然冷却至室温；5蒸馏水，3min×3次，加3％双氧水，置于摇床，70转min，15min；6弃双氧水，蒸馏水涮洗，1×PBST，3min×3次；7甩干，加A液非特异性染色阻断剂于室温，湿盒内20min；8弃封闭液，加一抗；91×PBST，3min×3次，甩干；10加B液生物素羊抗兔鼠IgG20min,1×PBST，3min×3次，甩干；11加C液链霉卵白素20min,1×PBST，3min×3次；12DAB显色，自来水终止染色；13自来水流水漂洗；14苏木素复染3min,自来水刷洗至无紫色；1595％盐酸酒精分化10～15s，自来水漂洗返蓝45min；1660％乙醇，80％乙醇，100％乙醇依次脱水3min；17放入二甲苯5min，透明化后，未干时滴加100uL树酯，封片。设计并制定了免疫标记食管鳞癌中HES2蛋白的评分标准表1，通过免疫组织化学的方法，识别并预测食管鳞癌的恶性程度及发展趋势。肿瘤细胞比例以DAB显色为例计算标准:由高倍镜20×下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定，染色强度评分标准:不着色0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分；阳性细胞所占比例评分标准:无阳性细胞者0分，阳性细胞数10％者1分；10％～35％者2分，36％～75％者3分，≥75％者4分。两种评分相乘得到分值SIStainingIndex：0～1分为Negative；2～4分为Weak；6～8分为Moderate；9～12分为strong，见表1。表1免疫标记食管鳞癌中HES2蛋白的评分标准结果如图2A-C：HES2染色强的集中在食管鳞状细胞癌病例中，且染色强度随食管鳞癌患者的肿瘤分化程度的降低而加深；高表达HES2基因的食管鳞癌患者，其总生存时间和无病生存时间均较短，HES2的高表达水平，预示患者更高的复发风险，因此可作为判断食管鳞状细胞癌患者预后的独立因素。实施例2：利用小发夹RNAshRNA稳定沉默HES2能抑制食管癌的恶性表型。1细胞培养及稳定株构建方法：分别用阴性对照shGFP及可以沉默HES2的shRNA包括shHES2#1和shHES2#2处理食管癌细胞Eca109和Kyse520。通过收相应蛋白进行WB验证。其中shHES2#1的靶向序列为：5'-CTGGAGCACCTGTGGCGGAG-3'SEQIDNO：5、shHES2#2的靶向序列为：5'-GCCTTGCGACAGCTACCGCG-3'SEQIDNO：6。结果：分别获得对照组细胞Eca109shGFP、Kyse520shGFP和沉默HES2的细胞Eca109shHES2#1、Eca109shHES2#2和Kyse520shHES2#1、Kyse520shHES2#2。2细胞生长实验方法：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。同一培养条件培养5天后，每孔加MTT溶液5mgml用PBS配20ul。继续孵育4小时，终止培养；小心弃去上清液，每孔加150ulDMSO，充分吹打。选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。本实验平行重复3次。结果：如图3中的A图所示，与对照组相比，沉默HES2的Eca109shHES2#1、Eca109shHES2#2和Kyse520shHES2#1、Kyse520shHES2#2食管鳞癌细胞的增殖能力受到显著抑制。3软琼脂糖集落形成实验方法：将1×104个对照组细胞和实验组细胞分别接种在含0.4％琼脂的培养基中，并平铺于含0.6％琼脂的培养基固化凝胶上。2到4周后计数集落数目，并计算出集落形成率集落形成率＝集落数目所种细胞数×100％，本实验平行重复3次。结果：如图3中的B图所示，与对照组相比，沉默HES2的Eca109shHES2#1、Eca109shHES2#2和Kyse520shHES2#1、Kyse520shHES2#2食管鳞癌细胞的集落形成能力受到显著抑制。4体外迁移试验方法：将重悬于无血清培养基的细胞种植于内置8微米膜滤器小室中。细胞被含10％胎牛血清的培养基所吸引。30小时后，细胞被固定、染色、计数。侵袭实验中，膜滤器为一层基质胶覆盖。重复3次独立实验。结果：如图3中的C图所示，与对照组相比，沉默HES2的Eca109shHES2#1、Eca109shHES2#2和Kyse520shHES2#1、Kyse520shHES2#2食管鳞癌细胞的迁移能力受到显著抑制。5三维细胞培养实验方法：将50％预先准备好的Matrigel胶200ul体系加入至24孔板中，置于37℃环境中使其凝固，再每孔加入300ul含10％FBS最终浓度、25％Matrigel最终浓度、2×104个细胞最终数量的体系，置于37℃、5％CO2孵箱中培养2周。此实验平行重复3次。结果：如图3中的D图所示，与对照组相比，沉默HES2的Eca109shHES2#1、Eca109shHES2#2和Kyse520shHES2#1、Kyse520shHES2#2食管鳞癌细胞的侵袭能力受到显著抑制。实施例3：利用靶向HES2的反义寡核苷酸链AON稳定沉默HES2能抑制食管癌的恶性表型1细胞培养及稳定株构建方法：分别用阴性对照Scramble及可以沉默HES2的AONHES2-AON#1、HES2-AON#2、HES2-AON#3、HES2-AON#4、HES2-AON#5处理食管癌细胞Eca109，工作浓度为5nM。HES2-AON#1：5'-GCTCACTAGTCCACTA-3'SEQIDNO：7；HES2-AON#2：5'-GCTGGTTAGATCTTAC-3'SEQIDNO：8；HES2-AON#3：5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9；HES2-AON#4：5'-AAGCAAGAGGTGGCAA-3'SEQIDNO：10；HES2-AON#5：5'-TCCAGAGTCAAGCAAG-3'SEQIDNO：11。1qRT-PCR检测反义寡核苷酸链沉默HES2基因后的食管鳞癌细胞系中HES2的mRNA表达水平。方法收集上述阴性对照组及实验组共6组细胞，分别利用Trizol提取RNA，使用MMLV反转录酶Promega进行反转录合成cDNA，使用2XSYBRmixRoche对各组细胞中HES2的表达水平进行qRT-PCR检测。以GAPDH做内参。所用q-PCR引物为：HES2-QF:AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTASEQIDNO:1HES2-QR:TGCAGGAAGCGCACGGTCATTTSEQIDNO:2GAPDH-QF:GCACCGTCAAGGCTGAGAACSEQIDNO:3GAPDH-QR:TGGTGAAGACGCCAGTGGASEQIDNO:4将每个样本获得的HES2基因的Ct值减去其内参基因GAPDH的Ct值得到△Ct，结果用△Ct表示，△Ct值越高，表示该基因的表达水平越低。结果：定量PCR结果图4中的A图显示，使用AON处理后的食管鳞癌细胞中HES基因的mRNA表达水平明显降低，尤其AON#3的作用最为显著。2免疫印迹实验验证反义寡核苷酸链沉默HES2基因后的食管鳞癌细胞系中HES2的蛋白表达水平。方法分别提取上述阴性对照组及实验组共6组细胞的总蛋白；应用SDS-PAGE电泳分离蛋白后，将蛋白转到硝酸纤维素膜上，脱脂牛奶封闭蛋白；用与HES2蛋白特异性结合的单克隆抗体一抗与其充分结合，再用与一抗特异性结合的二抗与其结合后，进行荧光显影，定影；将图片扫描并定量分析。结果：如图4中的B图所示，与上述qRT-PCR结果一致，使用AON处理后的食管鳞癌细胞中HES基因的蛋白表达水平明显降低，尤其AON#3的作用最为显著。可见，通过实验从5个不同的AON中验证获得最有效下调HES2表达的AON靶向序列HES2-AON#3。3体内实验1小鼠体内成瘤实验方法：首先进行构建小鼠体内癌症模型，将1×106个食管癌细胞Eca109进行小鼠皮下注射，在培养1周后开始在皮下瘤进行HES2-AON#3实验组或者PBS对照组的注射。结果：如图4中的C图所示，处理组与对照组相比，肿瘤体积明显小于对照组，表明沉默HES2能显著抑制食管癌细胞的体内形成肿瘤的大小。2小鼠肺转移模型方法：经小鼠尾静脉注射1×105个Eca109细胞，在体内培养1周后，通过腹腔注射HES2-AON#3实验组或者PBS对照组，观察小鼠肺转移的情况。结果：如图4中的D图所示，用Eca109HES2-AON处理的小鼠的肺转移癌的生长能力下降，表明沉默HES2能抑制食管癌细胞的肺转移能力。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。SEQUENCELISTING110中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）广州杰尔克生物技术有限公司120基因HES2在食管鳞癌辅助诊断、预后判断和治疗中的应用13016011170PatentInversion3.5210121122212DNA213人工序列4001aaccagagcctgagccagctta22210221122212DNA213人工序列4002tgcaggaagcgcacggtcattt22210321120212DNA213人工序列4003gcaccgtcaaggctgagaac20210421119212DNA213人工序列4004tggtgaagacgccagtgga19210521120212DNA213人工序列4005ctggagcacctgtggcggag20210621120212DNA213人工序列4006gccttgcgacagctaccgcg20210721116212DNA213人工序列4007gctcactagtccacta16210821115212DNA213人工序列4008gctggttagatctta15210921116212DNA213人工序列4009gtgaaattgatgctcg162101021116212DNA213人工序列40010aagcaagaggtggcaa162101121116212DNA213人工序列40011tccagagtcaagcaag16

权利要求：1.定量检测HES2的试剂在制备食管鳞癌辅助诊断或和预后诊断产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述定量检测HES2的试剂选自定量检测HES2的RNA转录水平的试剂、定量检测HES2的蛋白表达水平的试剂中的至少一种。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述定量检测HES2的RNA转录水平的试剂选自定量检测HES2的引物或探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述定量检测HES2的引物为：上游引物：5'-AACCAGAGCCTGAGCCAGCTTA-3'SEQIDNO:1；下游引物：5'-TGCAGGAAGCGCACGGTCATTT-3'SEQIDNO:2。5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒或芯片。6.抑制HES2表达的试剂在制备治疗或辅助治疗食管鳞癌产品中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制HES2表达的试剂选自沉默HES2表达的siRNA、沉默HES2表达的shRNA、沉默HES2表达的反义寡核苷酸链中的至少一种。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述沉默HES2表达的siRNA或者shRNA的靶向序列选自以下至少一种：5'-CTGGAGCACCTGTGGCGGAG-3'SEQIDNO：5；5'-GCCTTGCGACAGCTACCGCG-3'SEQIDNO：6。9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述沉默HES2表达的反义寡核苷酸链选自以下至少一种：HES2-AON#1：5'-GCTCACTAGTCCACTA-3'SEQIDNO：7；HES2-AON#2：5'-GCTGGTTAGATCTTAC-3'SEQIDNO：8；HES2-AON#3：5'-GTGAAATTGATGCTCG-3'SEQIDNO：9；HES2-AON#5：5'-TCCAGAGTCAAGCAAG-3'SEQIDNO：11。10.根据权利要求6～9任一项所述的应用，其特征在于，所述产品为药剂或保健品。

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