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申请/专利权人：广西壮族自治区民族医药研究院

摘要：本发明公开了一种武打将军酊的检验方法，在武打将军酒质量标准已有的分别鉴别虎杖、川芎、徐长卿、薄荷脑、龙血竭的基础上，改进了川芎的薄层鉴别，增加了莪术的薄层鉴别，通过将原标准鉴别的硅胶G吸附剂改进为硅胶H吸附剂、将正己烷-乙酸乙酯9:1展开剂改进为石油醚30-60℃-乙酸乙酯98:2，实现了在同一薄层色谱条件下，通过不同的检视方法，同时鉴别川芎及莪术两味药材；同时，增加了对虎杖和徐长卿药物的含量测定，即：采用高效液相色谱法测定武打将军酊成品中虎杖的有效成分虎杖苷的含量及徐长卿的有效成分丹皮酚的含量，从而提高了药品质量控制的专属性和有效性，有利于实现对武打将军酊产品质量的有效控制。

主权项：一种武打将军酊的检验方法，其特征在于包括川芎和莪术的薄层鉴别、虎杖和徐长卿的含量测定；所述薄层鉴别采用体积比为98:2的石油醚‑乙酸乙酯混合液为展开剂，展开后先置紫外光灯365nm下检视川芎，再喷以5％磷钼酸试液，加热后于日光下检视莪术；所述含量测定采用高效液相色谱法测定虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量，高效液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，分别以甲醇和水为流动相A和流动相B进行梯度洗脱。

全文数据：武打将军酊的检验方法技术领域[0001]本发明属于药品质量检测技术领域，尤其涉及一种武打将军酊的检验方法。背景技术[0002]武打将军酊是一种广泛应用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、风湿骨痛、类风湿关节痛、骨质增生性刺痛的壮药制剂，它与"武打将军酒"源于同一个处方，由飞龙掌血、豆豉姜、龙血竭等十三味药材制成。该系列产品"武打将军酒"的质量标准收载于桂卫药制药字2003800005，只制订有虎杖、川芎、徐长卿、薄荷脑、龙血竭的薄层鉴别方法，无药物定量检测，不利于有效控制成品的质量优劣。发明内容[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种准确可靠的武打将军酊的检验方法，以满足武打将军酊产品质量控制的需要。[0004]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案:武打将军酊的检验方法，包括川芎和莪术的薄层鉴别、虎杖和徐长卿的含量测定；薄层鉴别采用体积比为98:2的石油醚30-60°C-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开后先置紫外光灯365nm下检视川芎，再喷以5%磷钼酸试液，加热后于日光下检视莪术;含量测定采用高效液相色谱法测定虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量，高效液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，分别以甲醇和水为流动相A和流动相B进行梯度洗脱。[0005]上述武打将军酊的检验方法，按以下步骤操作进行：[0006]〈1川芎和莪术的薄层鉴别[0007]取本品30ml，置分液漏斗中，加水30ml，摇匀，加乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，加无水硫酸钠l〇g，振摇，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取川芎对照药材粉末1g，加乙醚20ml，40°C水浴加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液;再取吉马酮对照品，加无水乙醇制成每ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液;参照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各8~10μ1，分别点于同一硅胶Η薄层板上，以体积比为98:2的石油醚30-60°C-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点；再喷以5%磷钼酸试液，热风吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；[0008]〈2虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量测定[0009]参照中国药典2010年版一部附录VID液相色谱法操作进行：[0010]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;可变波长检测;理论板数按虎杖苷峰计应不低于5000;按丹皮酚峰计应不低于3000;[0011][0012]对照品溶液的制备取虎杖苷对照品与丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml中含虎杖苷40yg和丹皮酚20yg的混合溶液，即得；[0013]供试品溶液的制备精密量取本品lml，置KM量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勾，滤过，取续滤液作为供试品溶液；[0014]测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色谱仪，测定，即得。[0015]上述武打将军酊按以下步骤制备:取虎杖150g、莪术100g、徐长卿50g、川芎50g、飞龙掌血50g、荜茇50g、骨碎补50g、乳香6g、三七6g、龙血竭lg、豆鼓姜50g、芒硝10g、薄荷脑4g共十三味，除乳香、芒硝、龙血竭、薄荷脑外，三七单独粉碎成最粗粉，余虎杖等八味亦一起粉碎成最粗粉，置容器内，加入50%乙醇1800ml，密闭，浸渍40天;滤过，滤液备用；乳香、芒硝、龙血竭分别研碎，加入上述滤液中，搅匀，密闭，静置15天;取上清液，加入薄荷脑，搅拌使溶解，加50%乙醇至总量为1000ml，搅匀，即得。[0016]最粗粉指能过一号筛中国药典筛号的药材粉末。[0017]发明人依据热销产品武打将军酒的配方开发了武打将军酊，然原质量标准只有虎杖、徐长卿、川芎、薄荷脑、龙血竭药材薄层鉴别，尚缺主药莪术的定性鉴别及主药虎杖和徐长卿的含量测定，难以实现对武打将军酊药品质量的优劣有效控制。为此，在原质量标准已有的分别鉴别虎杖、川芎、徐长卿、薄荷脑、龙血竭的基础上，发明人改进了川芎的薄层鉴另IJ，增加了莪术的薄层鉴别，通过将原标准鉴别的硅胶G吸附剂改进为硅胶Η吸附剂、将正己烷-乙酸乙酯9:1展开剂改进为石油醚30-60°C-乙酸乙酯98:2，实现了在同一薄层色谱条件下，通过不同的检视方法，可同时鉴别川芎及莪术两味药材；同时，本发明增加了对虎杖和徐长卿药物的含量测定，即：采用高效液相色谱法测定武打将军酊成品中虎杖的有效成分虎杖苷的含量及徐长卿的有效成分丹皮酚的含量，从而提高了药品质量控制的专属性和有效性，有利于实现对武打将军酊产品质量的有效控制。具体实施方式[0018]以下实施例所用试剂和器材如下：[0019]1.吉马酮对照品：批号：111665-201204,中国食品药品检定研究院提供。[0020]2.川芎对照药材:批号：120918-201110，中国食品药品检定研究院提供。[0021]3.丹皮酚对照品：批号：110708-200506,中国食品药品检定研究院提供。[0022]4.虎杖苷对照品：批号：11575-200502，中国食品药品检定研究院提供。[0023]5.试验样品：申请人自制的武打将军酊和武打将军酒。[0024]6.岛津LC-20A高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，LCSolution色谱工作站（日本岛津公司）。[0025]7.Y0K0-ZS紫外分析摄影仪武汉药新技术开发有限公司）。[0026]8.1105电子分析天平XS205BDU瑞士梅特勒公司）。[0027]实施例1制备武打将军酊[0028]取虎杖150g、莪术100g、徐长卿50g、川考50g、飞龙掌血50g、荜茇50g、骨碎补50g、乳香6g、三七6g、龙血竭lg、豆豉姜50g、芒硝10g、薄荷脑4g共十三味，除乳香、芒硝、龙血竭、薄荷脑外，三七单独粉碎成最粗粉过一号药典筛），余虎杖等八味亦一起粉碎成最粗粉，置容器内，加入50%乙醇1800ml，密闭，浸渍40天;滤过，滤液备用；乳香、芒硝、龙血竭分别研碎，加入上述滤液中，搅匀，密闭，静置15天;取上清液，加入薄荷脑，搅拌使溶解，加50%乙醇至总量为l〇〇〇ml，搅匀，即得。[0029]照上述方法制备三批武打将军酊产品，批号分别为140501、140502、140503。[0030]实施例2川考和莪术的薄层鉴别[0031]取实施例1的三批次武打将军酊产品，按本发明建立的检验方法进行川芎和莪术的薄层鉴别，具体如下：[0032]取本品30ml，置分液漏斗中，加水30ml，摇匀，加乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，加无水硫酸钠l〇g，振摇，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取川芎对照药材粉末1g，加乙醚20ml，40°C水浴加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液;再取吉马酮对照品，加无水乙醇制成每ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液;参照中国药典薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB试验，吸取上述三种溶液各8~10μ1，分别点于同一硅胶Η薄层板上，以体积比为98:2的石油醚30-60°C_乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点；再喷以5%磷钼酸试液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。[0033]实施例3虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量测定[0034]取实施例1的三批次武打将军酊产品，按本发明建立的检验方法进行虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量测定，具体如下：[0035]参照液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID操作进行：[0036]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;可变波长检测;流速为每分钟0.8ml;理论板数按虎杖苷峰计应不低于5000;按丹皮酚峰计应不低于3000;[0037][0038]对照品溶液的制备取虎杖苷对照品与丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml中含虎杖苷40yg和丹皮酚20yg的混合溶液，即得；[0039]供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；[0040]测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。[0041]取三批次武打将军酒产品，参照武打将军酒质量标准[桂卫药制药字（2003800005]进行检验，实施例及对比实验结果如下。[0042]表1武打将军酒及武打将军酊定性定量测定结果[0043][0044]按本发明的检验方法，武打将军酊每lml含虎杖以虎杖苷（C2〇H22〇8计不得少于0.05mg;每lml含徐长卿以丹皮酸C9H1QO3计不得少于0.06mg。

权利要求：1.一种武打将军酊的检验方法，其特征在于包括川芎和莪术的薄层鉴别、虎杖和徐长卿的含量测定;所述薄层鉴别采用体积比为98:2的石油醚-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开后先置紫外光灯365nm下检视川芎，再喷以5%磷钼酸试液，加热后于日光下检视莪术;所述含量测定采用高效液相色谱法测定虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量，高效液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，分别以甲醇和水为流动相A和流动相B进行梯度洗脱;该法具体按以下步骤操作进行：〈1川芎和莪术的薄层鉴别取本品30ml，置分液漏斗中，加水30ml，摇匀，加乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，加无水硫酸钠l〇g，振摇，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液;取川芎对照药材粉末1g，加乙醚20ml，40°C水浴加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液;再取吉马酮对照品，加无水乙醇制成每ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液;参照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各8~10yl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为98:2的石油醚-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点;再喷以5%磷钼酸试液，热风吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；〈2虎杖中虎杖苷和徐长卿中丹皮酚的含量测定参照中国药典2010年版一部附录VID液相色谱法操作进行：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;可变波长检测；理论板数按虎杖苷峰计应不低于5000;按丹皮酚峰计应不低于3000;对照品溶液的制备取虎杖苷对照品与丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml中含虎杖苷40yg和丹皮酚20yg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备精密量取本品lml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各l〇yl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.根据权利要求1所述的武打将军酊的检验方法，其特征在于所述武打将军酊按以下步骤制备:取虎杖150g、莪术100g、徐长卿50g、川芎50g、飞龙掌血50g、荜茇50g、骨碎补50g、乳香6g、三七6g、龙血竭lg、豆豉姜50g、芒硝10g、薄荷脑4g共十三味，除乳香、芒硝、龙血竭、薄荷脑外，三七单独粉碎成最粗粉，余虎杖等八味亦一起粉碎成最粗粉，置容器内，加入50%乙醇1800ml，密闭，浸渍40天;滤过，滤液备用；乳香、芒硝、龙血竭分别研碎，加入上述滤液中，搅匀，密闭，静置15天;取上清液，加入薄荷脑，搅拌使溶解，加50%乙醇至总量为1000ml，搅匀，即得。3.根据权利要求2所述的武打将军酊的检验方法，其特征在于:所述最粗粉指能通过中国药典一号筛的药材粉末。

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