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恭喜河南农业大学王伟获国家专利权

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龙图腾网恭喜河南农业大学申请的专利一种玉米ZmCP03基因的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115960948B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211109297.6,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种玉米ZmCP03基因的应用是由王伟;张慧;李艳华;刘辉;宋松波设计研发完成,并于2022-09-13向国家知识产权局提交的专利申请。

一种玉米ZmCP03基因的应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种玉米ZmCP03基因的应用,玉米ZmCP03基因在玉米植株中过表达,用于提高玉米抗旱性;玉米ZmCP03基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示,玉米ZmCP03基因的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本发明的玉米ZmCP03基因在玉米植株中过表达,用于提高玉米抗旱性。

本发明授权一种玉米ZmCP03基因的应用在权利要求书中公布了:1.一种玉米ZmCP03基因的应用,其特征在于,所述玉米ZmCP03基因在玉米植株中过表达,用于提高玉米抗旱性;所述玉米ZmCP03基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示,所述玉米ZmCP03基因的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示;所述玉米ZmCP03基因在玉米植株中过表达的方法为: S1、ZmCP03基因的克隆: S101、选择玉米B73自交系为实验材料,提取三叶期玉米叶片组织RNA,并反转录成cDNA; S102、以S101中得到的cDNA为模板,用引物ZmCP03-F和引物ZmCP03-R为引物进行PCR扩增,得到PCR产物; 所述PCR扩增的反应体系为:cDNA1μL、KOD高保真酶1μL、引物ZmCP03-F1μL、引物ZmCP03-R1μL、buffer5μL、dNTPmix10μL、无菌水补足至50μL; 所述PCR扩增的反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,50℃退火45s,72℃延伸64s,共30个循环后,加入0.5μL的Taq酶,72℃延伸10min; 所述引物ZmCP03-F的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示; 所述引物ZmCP03-R的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示; S103、将S102中得到的PCR产物用胶回收试剂盒进行切胶回收后,与载体pCambia3300连接,然后转化到大肠杆菌Trans5α感受态细胞中,用XbaIBamHI进行双酶切验证,筛选取1~3个阳性条带对应的菌液,测序; S2、ZmCP03基因的生物信息学分析: 将S103中测序的结果经过Mega4.0软件与玉米ZmCP03基因的核苷酸序列比对,若核苷酸序列相同,即为克隆成功,克隆成功的S102中所述PCR产物即为ZmCP03目的基因片段; S3、玉米ZmCP03基因过表达载体的构建: 将载体pCambia3300用BsaIEco31I进行双酶切,得到pCambia3300载体大片段;将S3中所述ZmCP03目的基因片段用BsaIEco31I进行双酶切,得到P-rDNAo1目的片段,电泳验证片段大小后,用琼脂糖凝胶回收试剂盒将酶切电泳产物回收后,将所述pCambia3300载体大片段和所述P-rDNAo1目的片段在T4连接酶的作用下,在温度为37℃的条件下连接反应1h,得到连接产物; 所述连接反应的体系为:pCambia3300载体大片段3μL、P-rDNAo1目的片段5μL、T4DNA连接酶1μL、10×T4DNA连接酶缓冲液1μL; 将得到的连接的产物转化大肠杆菌感受态细胞,将转化菌液涂布于含卡那霉素的LB固体培养基上,在温度为37℃的条件下培养12h后,挑选阳性克隆进行培养,进行菌斑PCR鉴定,得到玉米ZmCP03基因过表达载体,即pCambia3300-ZmCP03质粒; S4、ZmCP03基因的玉米遗传转化: 用S3中得到的pCambia3300-ZmCP03质粒转化农杆菌,侵染玉米自交系B104幼胚的幼胚,经过诱导培养、共培养培养、筛选培养、分化培养、生根培养和移栽成苗,得到ZmCP03转基因的阳性植株; S5、ZmCP03转基因的阳性植株的鉴定:S4中得到的ZmCP03转基因的阳性植株进行ZmCP03基因PCR检测,在1059bp的位置扩增出与阳性对照S3中所述pCambia3300-ZmCP03质粒中大小一致的一条带,测序后序列比对正确,则为玉米ZmCP03基因过表达植株。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人河南农业大学,其通讯地址为:450046 河南省郑州市郑东新区平安大道218号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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