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龙图腾网恭喜华中农业大学申请的专利基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117363761B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311342586.5，技术领域涉及：C12Q1/689；该发明授权基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法是由丁芳;刘国媛;于江莲;洪霓;王国平设计研发完成，并于2023-10-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法在说明书摘要公布了：本发明供了基于MIRA‑LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法，所述引物探针组合包括一个引物对和一个探针，其中引物对序列如SEQIDNO.1～2所示，探针序列如SEQIDNO.3或4所示，该引物探针组合具有高灵敏性和特异性。采用该引物探针组合，本发明利用MIRA结合LFD技术提供了一种柑橘黄龙病菌的快速检测方法，实现了柑橘黄龙病的快速、灵敏、特异性、可视化诊断；而且该方法操作简便、省时高效、结果可靠，解决了传统检测技术耗时长、步骤繁琐等问题，检测过程不需要特殊的仪器设备，检测成本低，可应用于野外现场等特殊环境，对黄龙病菌田间早期检测与诊断具有重大意义。

本发明授权基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法在权利要求书中公布了：1.一种基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取柑橘叶中脉，切成薄片后加入NaOH溶液中研磨，将所得汁液稀释后作为模板； S2、向MIRA多酶体系中加入模板以及引物和探针，所得反应体系进行反应； S3、将S2所得反应产物滴加至胶体金试纸条上，观察结果；所述胶体金试纸条含有检测线和质控线，所述检测线上含有生物素配体，所述质控线上含有抗FAM抗体； 所述引物包括正向引物RPnrdB-F1和反向引物RPnrdB-R1，且其序列分别为： RPnrdB-F1：5’-CATCATGCGAGATGAATCACTGCATCTCAA-3’， RPnrdB-R1：5’-Biotin-TGATATTCTGTGACCCGAGTTTCGAAGAAG-3’； 所述探针为探针P1或探针P2，其中所述探针P1为： 5’-6-FAM-CGCACCATGCTCCATGAAGCTACCCTCCTCGATHFATCGCCTATGCACATG-C3-spacer； 所述探针P2为： 5’-6-FAM-ATGCTCCCTCATGTGAACAATATATGCAGTTHFTCATCGCCAATCGTC-C3-spacer； 所述汁液用TEBuffer进行稀释； 步骤S2所述反应的温度为36～37℃，且反应的时间为11～12min；在步骤S2中，利用带有PE手套的手部温度进行反应； 在步骤S1中，所述薄片的厚度为0.1～0.15mm，所述薄片的个数为6～24；所述NaOH溶液的浓度为0.5molL，所述NaOH溶液的加入量为10～20μL； 所述反应体系为：10μmolL正反向引物各0.5μL，模板2μL，1μmolL的探针1.2μL，MIRA反应所需混合酶和缓冲液，再补加ddH2O至12.5μL。

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