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恭喜江西农业大学李骏获国家专利权

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龙图腾网恭喜江西农业大学申请的专利一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117646015B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311472755.7,技术领域涉及:C12N15/70;该发明授权一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法及其应用是由李骏;方诗琦;唐宇航;陈国庆;周雯雯;谢琳琳;孙超;万爽设计研发完成,并于2023-11-07向国家知识产权局提交的专利申请。

一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法,并使其应用于丙硫醇的降解,该方法以一株高效降解丙硫醇的恶臭假单胞菌S‑1全基因组为模板,克隆硫醌氧化还原酶编码基因sqr,选择pET28a作为表达载体,将sqr基因和线性化的载体使用一步克隆的方法构建重组质粒pET28a‑sqr,通过热激转化导入大肠杆菌BL21,成功构建BL21pET28a‑sqr表达菌株。经培养诱导后,超声破碎后通过重力法组氨酸标签纯化得到SQR蛋白。后续以BL21pET28a作为对照菌株,基于气相色谱‑质谱仪GC‑MSGasChromatographycoupledtoMassSpectrometry测定重组表达菌株及SQR蛋白转化丙硫醇能力。通过本发明提供的方法获得一种硫醌氧化还原酶并表征其转化丙硫醇的功能,将有利于硫醇降解菌的应用与改造。

本发明授权一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种具备丙硫醇转化能力的假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法的应用,其特征在于:该体外表达纯化方法以假单胞菌S-1全基因组为模板选择pET28a和大肠杆菌BL21分别作为表达载体和表达宿主,主要包括下述步骤: 步骤一、构建重组表达载体:设计sqr基因扩增引物,设计正向引物5’端引入BamHⅠ酶切位点,在反向引物5’端引入HindⅢ酶切位点,PCR扩增出sqr基因后,利用一步克隆技术将其与酶切后线性化载体pET28a重组,其中引入酶切位点后的正向引物klsF序列为:5’-cagcaaatgggtcgcggatccATGAATACTTATAAATTAAGTTCGGATTTTT-3’,反向引物klsR序列为:5’-ctcgagtgcggccgcaagcttTTAATGCTCCGACTCGCTTGC-3’; 步骤二、通过热激转化将表达载体转化至大肠杆菌BL21中,扩大培养后在低温条件下诱导硫醌氧化还原酶SQR的表达; 步骤三、收集菌体超声破碎,破碎后离心的上清可溶性蛋白经Ni-NTA柱子进行纯化得到SQR蛋白; 步骤四、BL21pET28a-sqr全细胞和细胞裂解液酶反应测定实验:GC-MS对其表型进行表征,以证明SQR蛋白成功表达且在一定程度上具备丙硫醇转化的能力; 该表达纯化方法所获取的大肠杆菌突变株应用于丙硫醇的降解,通过转化丙硫醇降低菌体代谢压力和缓解硫胁迫。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人江西农业大学,其通讯地址为:330033 江西省南昌市志敏大道1101号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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