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龙图腾网恭喜中国人民解放军军事科学院军事医学研究院申请的专利一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119776344B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510265135.9，技术领域涉及：C12N15/10；该发明授权一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法是由赵志虎;侯甲宝;谢德健;沈文龙;张彦;李平;邓峻玮设计研发完成，并于2025-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法，涉及分子生物学技术领域。本发明所述方法包括如下步骤：甲醛和二琥珀酰亚胺戊二酸（DSG）交联细胞后，使用限制性内切酶DpnII进行酶切处理、末端修复和邻近连接；连接后超声破碎细胞核得到超声破碎产物，将超声破碎产物一分为二，一部分产物用生物素化异噁唑捕获DNA和蛋白复合体，使用蛋白酶消化蛋白质，提取纯化DNA，对纯化后的DNA进行建库测序；另外一部分产物经核酸酶处理、提取蛋白，然后进行蛋白质谱分析。本发明可以实现全基因组无破坏性检测无序蛋白及其结合的染色质三维结构，对其结构分析提供有效途径。

本发明授权一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法在权利要求书中公布了：1.一种同时富集无序蛋白及其结合三维基因组结构的方法，其特征在于，包括如下步骤：对待测细胞进行交联、裂解，提取获得细胞核；使用限制性内切酶DpnII对获得的细胞核进行酶切、末端修复和邻近连接处理；对邻近连接处理后的细胞核进行超声破碎获得超声破碎产物；将所述超声破碎产物一分为二得到产物I和产物II，所述产物I用生物素化异噁唑富集超声破碎后的DNA和蛋白的复合体，对所述的DNA和蛋白的复合体进行洗涤、洗脱以及蛋白酶处理；蛋白酶处理后提取、纯化DNA，对纯化后的DNA进行建库测序；所述产物II经核酸酶处理、提取蛋白，然后进行蛋白质谱分析；使用甲醛和二琥珀酰亚胺戊二酸对待测细胞进行交联；所述交联包括如下步骤：将待测细胞重悬于1×PBS溶液中，加入甲醛孵育8~15min后加甘氨酸终止反应；终止反应后用1×PBS溶液洗涤，使用含有3mM二琥珀酰亚胺戊二酸的1×PBS溶液重新悬浮，室温下孵育30~50min后，加入甘氨酸继续孵育；使用含有0.05%牛血清白蛋白的1×PBS溶液洗涤，调整细胞浓度后离心、去上清，收集细胞于液氮中冷冻保存；所述酶切步骤为：细胞裂解后加入10~15μL10×NEB缓冲液3.1和400U限制性内切酶DpnII，混合后，在37℃的摇床上过夜消化；60~68℃下孵育15~25min以灭活DpnII，然后在冰上冷却进行末端修复和邻近连接处理；所述末端修复的反应液包括5~10μL10×NEB缓冲液3.1，1~2μL10mMdCTP，1~2μL10mMdGTP，1~2μL10mMdTTP，10~20μL1mM生物素-14-dATP和8~15μL5UμLDNA聚合酶I大片段Klenow；所述邻近连接的反应液包括100~150μL10×T4连接缓冲液，100~150μL10%TritonX-100，40~60μLT4DNA连接酶和300~400μLMilli-Q水。

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