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龙图腾网恭喜四川大学申请的专利一种提高绵羊李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116218754B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310373235.4，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一种提高绵羊李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用是由汪川;唐明圆;雷瑶;陈科翰;田思成;张秋阳设计研发完成，并于2023-04-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种提高绵羊李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及一种提高绵羊李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用，构建了敲除dal、dat基因的LIΔdaldat菌株，同时构建携带dal基因的回补质粒pCW633，并将其电转入营养缺失株LIΔdaldat中，构建稳定的重组菌株LIΔdaldat::pCW633。与野生株LI相比，重组菌株LIΔdaldat::pCW633分泌MVs产量可提高1.44倍，且重组菌株分泌的MVs的形状结构、粒径尺寸与蛋白组分与野生株分泌的MVs无明显差别。本发明可解决LIMVs产量低的问题，可用于LIMVs相关的基础研究，包括LIMVs多组学研究、LIMVs潜在生物学功能研究以及以LIMVs为载体的相关制剂应用。

本发明授权一种提高绵羊李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种提高绵羊李斯特菌Listeriaivanovii膜囊泡产量的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）敲除绵羊李斯特菌野生株LI的dal、dat基因，获得菌株LIΔdaldat，并制备LIΔdaldat感受态细胞；（2）将打靶质粒pCW633电转入LIΔdaldat感受态细胞中，得到菌株LIΔdaldat::pCW633；（3）培养LIΔdaldat::pCW633，离心取上清，提取纯化得到绵羊李斯特菌膜囊泡LIMVs；打靶质粒pCW633的制备方法如下：（2-A）培养携带pCW630质粒的大肠杆菌，提取质粒pCW630，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，利用SEQIDNO.13所示的引物Vector633-F、SEQIDNO.14所示的引物Vector633-R从质粒pCW630扩增载体片段Vector633，其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示；利用SEQIDNO.15所示的引物phly-LMdal-F、SEQIDNO.16所示的引物phly-LMdal-R从质粒pCW630扩增插入片段phly-LMdal，其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示，连接载体片段Vector633与插入片段phly-LMdal，得到连接产物；（2-B）连接产物转化大肠杆菌DH5αΔasd感受态细胞，利用SEQIDNO.19所示的引物pCW633-SX-F、SEQIDNO.20所示的引物pCW633-SX-R进行菌落PCR筛选，提取质粒pCW633，其核苷酸序列如SEQIDNO.21所示。

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