恭喜重庆安赛搏新材料技术有限公司王鹏获国家专利权
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龙图腾网恭喜重庆安赛搏新材料技术有限公司申请的专利一种同时提高高山火绒草愈伤组织的总黄酮和多种有机酸的调控方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN109593705B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201811628974.9,技术领域涉及:C12N5/04;该发明授权一种同时提高高山火绒草愈伤组织的总黄酮和多种有机酸的调控方法是由王鹏;刘水燕;何俊雄;侯蒙蒙;张卫;谭光伟设计研发完成,并于2018-12-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种同时提高高山火绒草愈伤组织的总黄酮和多种有机酸的调控方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种同时提高高山火绒草愈伤组织和悬浮培养细胞的总黄酮和多种有机酸的调控方法。本发明主要采用特定的调控方案,同时添加2种协同使用效果优良的诱导剂,AgNO3水溶液和水杨酸(SA)95%乙醇溶液,可以使高山火绒草愈伤组织和悬浮细胞的总黄酮、绿原酸、火绒草酸含量均得到提高。按本专利所述培养策略可以使高山火绒草细胞系在0.1‑200L规模均保持稳定的生长和黄酮类及多种有机酸类次生代谢物的表达。
本发明授权一种同时提高高山火绒草愈伤组织的总黄酮和多种有机酸的调控方法在权利要求书中公布了:1.一种同时提高高山火绒草愈伤组织和悬浮培养细胞的总黄酮和多种有机酸的调控方法,所述的有机酸指的是:绿原酸、火绒草酸、二咖啡酰奎宁酸,其特征在于按如下的步骤进行:(1)高山火绒草愈伤组织悬浮培养:选取质地疏松、颜色浅黄色至黄色、生长速度快的高山火绒草愈伤组织,按0.1-2g10mL比例,接入悬浮培养基CM2,置于摇床100-115rpm培养,温度保持20-25℃,按5-15g100mL湿重比例每7d继代一次,生长速度2-3倍7d;所述的悬浮培养基CM2指的是:B5+1-2mgL2,4-D+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白或B5+1-2mgL2,4-D+0.1-0.2mgL6-BA+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白,pH5.8-6.0;(2)代谢调控工艺:向已生长7天的高山火绒草悬浮培养物中以无菌方式加入0.22μm微孔滤膜过滤除菌的50mMAgNO3水溶液和500mM水杨酸SA,95%乙醇溶液,使其终浓度分别达到2.5-15μMAgNO3和20-100mMSA;继续按原培养方案培养2-5天收获;或(1)高山火绒草愈伤组织悬浮培养:选取质地疏松、颜色浅黄色至黄色、生长速度快的高山火绒草愈伤组织,按0.1-2g10mL比例,接入悬浮培养基CM2,置于摇床100-115rpm培养,温度保持20-25℃,按5-15g100mL湿重比例每7d继代一次,生长速度2-3倍7d;所述的悬浮培养基CM2指的是:B5+1-2mgL2,4-D+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白或B5+1-2mgL2,4-D+0.1-0.2mgL6-BA+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白,pH5.8-6.0;(2)高山火绒草愈伤组织的一次性生物反应器培养:选取状态一致的已培养7d的悬浮培养材料,向5L一次性生物反应器中接入1500-2500mL培养物和除菌处理的2500-3500mL悬浮培养基CM2使终体积为5000mL,振频为9.5次min,通空气为0.1m³h,培养7d;继代时,将培养物接入新的一次性生物反应器,加入2-4倍体积的悬浮培养基CM2,振荡并通气培养,振荡频率范围为2-15次min,通气量为0.05-0.3m³h;所述的悬浮培养基CM2指的是:B5+1-2mgL2,4-D+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白或B5+1-2mgL2,4-D+0.1-0.2mgL6-BA+30gL蔗糖+0.1mgLL-谷氨酰胺+0.2mgL水解乳蛋白,pH5.8-6.0;(3)代谢调控工艺:向已生长7天的高山火绒草悬浮培养物中以无菌方式加入0.22μm微孔滤膜过滤除菌的50mMAgNO3水溶液和500mM水杨酸SA,95%乙醇溶液,使其终浓度分别达到2.5-15μM,AgNO3和20-100mMSA;继续按原培养方案培养2-5天收获。
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