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龙图腾网恭喜中国农业科学院植物保护研究所申请的专利基于CRISPR/LbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体及构建方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119193691B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411628526.4，技术领域涉及：C12N15/84；该发明授权基于CRISPR/LbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体及构建方法和应用是由李方方;周雪平;徐子妍;李浩设计研发完成，并于2024-11-14向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于CRISPR/LbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体及构建方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于CRISPRLbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体及构建方法和应用，所述双生病毒为TYLCCNV与其伴随的卫星病毒TYLCCNB；包括针对TYLCCNV的复制关键位点构建的pCambia1300:LbCas12‑fgY10A及pCambia1300:T5exo‑LbCas12‑fgY10A载体、针对TYLCCNB的复制关键位点构建的pCambia1300:LbCas12‑fgY10b及pCambia1300:T5exo‑LbCas12‑fgY10b载体、针对TYLCCNVTYLCCNB复制关键位点构建的pCambia1300:T5exo‑LbCas12‑Y10*4载体中的至少一种。本发明针对双生病毒的复制关键位点设计crRNA，比目前常用的CRISPRCas9系统具有更好的抗病活性。

本发明授权基于CRISPR/LbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体及构建方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于CRISPRLbCas12a系统抑制双生病毒侵染载体，其特征在于：所述双生病毒为TYLCCNVTYLCCNB；包括针对TYLCCNV的复制关键位点构建的pCambia1300:LbCas12-fgY10A及pCambia1300:T5exo-LbCas12-fgY10A载体、针对TYLCCNB的复制关键位点构建的pCambia1300:LbCas12-fgY10b及pCambia1300:T5exo-LbCas12-fgY10b载体、针对TYLCCNVTYLCCNB复制关键位点构建的pCambia1300:T5exo-LbCas12-Y10*4载体中的至少一种；在TYLCCNV复制关键位点附近选定PAM位点并设计两条crRNA，构建含该位点的pCambia1300:LbCas12-fgY10A载体所需的2条crRNA链：fgY10A-F1R1，其序列如SEQIDNO：1-2所示；在TYLCCNB复制关键位点附近选定PAM位点并设计crRNA，构建含该位点的pCambia1300:LbCas12-fgY10b载体所需的2条crRNA链：fgY10b-F1R1，其序列如SEQIDNO：3-4所示；将单链crRNA合成为双链；在LbCas12a的5’端融合T5核酸酶，并针对TYLCCNV和TYLCCNB的复制关键位点同时编辑病毒四个靶点的编辑载体pCambia1300:T5exo-LbCas12-Y10*4；其中，在TYLCCNV复制关键位点附近选定PAM位点并设计两条crRNA，以及在TYLCCNB复制关键位点附近选定PAM位点并设计两条crRNA，并将4条crRNA序列利用锤头状核酶HH和丁型肝炎病毒核酶HDV隔开进行串联，人工合成该序列，命名为Y10*4，其序列如SEQIDNO：5所示；在LbCas12a的5’端融合T5核酸酶，其中LbCas12a和T5核酸酶的序列如SEQIDNO：6-7所示。

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