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龙图腾网恭喜华宇生物科技(腾冲)有限公司;华派生物工程集团有限公司申请的专利采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115901984B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211070148.3，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法是由杜平;严欢;杨雪;刘鹏;钟丽君;刘潇;何清;田丽梅;于谦;段盛松;李峰;王俊;盛泽君设计研发完成，并于2022-09-02向国家知识产权局提交的专利申请。

本采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法，涉及口蹄疫病毒样颗粒抗原定量分析技术领域。本发明具体包括以下步骤：用自动梯度混合仪制备20%‑45%的蔗糖梯度，将500µl口蹄疫病毒样颗粒置与蔗糖梯度顶部；在10℃条件下以38000rpm离心3.5h分离病毒样颗粒；将超速离心管和高效液相色谱仪相连，以色谱仪的泵头为驱动力，检测流速为0.28mlmin；采用紫外和激光检测器连续检测蔗糖梯度溶液的光学信号，通过计算机软件系统分析样品的出峰面积；根据甲状腺球蛋白标准品紫外吸收峰面积和蛋白浓度的回归方程计算病毒样颗粒的含量。本发明可用于口蹄疫病毒样颗粒组装效率测定及监测多种口蹄疫病毒样颗粒疫苗的抗原含量，间接评价疫苗效力。

本发明授权采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法在权利要求书中公布了：1.采用蔗糖密度梯度超速离心测定口蹄疫病毒样颗粒的方法，其特征在于：测定方法具体包括以下步骤；S1：用pH8.0的TNE缓冲液分别配制20%和45%的蔗糖溶液；取规格为4.5ml的超速离心管，通过梯度混合仪自带的刻度尺对超速离心管进行标记；先将20%的蔗糖溶液加入超速离心管至标记处，再用长针头将45%的蔗糖溶液从底部加入超速离心管至顶部；将装有蔗糖梯度溶液的超速离心管至于梯度混合仪中，选择20%-45%蔗糖梯度制备程序，连续工作90s，得20%-45%连续梯度的蔗糖溶液；S2：取口蹄疫病毒样颗粒组装混合液，通过高速离心机以8000rpm离心3min，取上清液备用；先从制备好的蔗糖梯度溶液顶层吸弃400µl，再加入500µl上清液，在10℃条件下通过超速离心机以35000rpm离心3.5h，得离心样品；S3：用末端带有15cm长针头且管径为0.5mm的管路将高效液相色谱仪的泵头和外部超速离心管相连，打开高效液相色谱仪的泵送系统和紫外检测系统，以45%的蔗糖溶液为流动相，平衡基线；S4：将长针头插入到含有离心样品的超速离心管底部；打开泵系统，设定流速为0.28mlmin，检测波长设定为280nm和259nm,色谱仪的电脑系统自动绘制浓度曲线，得目标峰的积分面积；S5：将甲状腺球蛋白标准蛋白用缓冲液在12.5-200µgml浓度范围间配置成6个浓度梯度的标准溶液样品；取标准溶液样品0.5ml，代替口蹄疫病毒样颗粒组装混合液按步骤S1-S3进行操作后，将长针头插入到含有标准溶液样品的超速离心管的管底；打开泵系统，以0.28mlmin的流速运行，在280nm紫外波长下进行检测，对蛋白的吸收峰进行积分得峰面积，并建立峰面积与浓度的线性回归方程；S6：根据S5中建立的蛋白浓度与峰面积的线性回归方程，将口蹄疫病毒样颗粒组装混合液吸收峰的积分面积代入回归方程，计算待测样品中病毒样颗粒的含量。

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