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龙图腾网恭喜四川大学申请的专利一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116179462B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310373316.4，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用是由汪川;唐明圆;雷瑶;陈科翰;田思成;张秋阳设计研发完成，并于2023-04-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用，从减毒李斯特菌LMΔactAplcB出发，构建了敲除dal、dat基因的LMΔactAplcBdaldat减毒菌株，同时构建携带dal基因的回补质粒pCW633，并将其电转入减毒营养缺失株LMΔactAplcBdaldat中，构建稳定的建重组菌株LMΔactAplcBdaldat::pCW633。相比于抗生素处理的方法，本发明构建的重组菌株LMΔactAplcBdaldat::pCW633分泌MVs的产量增加更显著。本发明可解决减毒LMMVs产量低的问题，可用于减毒LMMVs相关的基础和应用研究。

本发明授权一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种提高减毒单增李斯特菌膜囊泡产量的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）敲除单增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）减毒株LMΔactAplcB的dal、dat基因，获得菌株LMΔactAplcBdaldat，并制备LMΔactAplcBdaldat感受态细胞；（2）将打靶质粒pCW633电转入LMΔactAplcBdaldat感受态细胞中，得到菌株LMΔactAplcBdaldat::pCW633；（3）培养LMΔactAplcBdaldat::pCW633，离心取上清，提取纯化得到减毒单增李斯特菌膜囊泡，即减毒LMMVs；打靶质粒pCW633的制备方法如下：（2-A）培养携带pCW630质粒的大肠杆菌，提取质粒pCW630，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，利用SEQIDNO.13所示的引物Vector633-F、SEQIDNO.14所示的引物Vector633-R从质粒pCW630中扩增载体片段Vector633，其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示；利用SEQIDNO.15所示的引物phly-LMdal-F、SEQIDNO.16所示的引物phly-LMdal-R从质粒pCW630中扩增插入片段phly-LMdal，其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示，连接载体片段Vector633与插入片段phly-LMdal，得到连接产物；（2-B）连接产物转化大肠杆菌DH5αΔasd感受态细胞，利用SEQIDNO.19所示的引物pCW633-SX-F、SEQIDNO.20所示的引物pCW633-SX-R进行菌落PCR筛选，提取质粒pCW633，其核苷酸序列如SEQIDNO.21所示。

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