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龙图腾网恭喜上海鹿明生物科技有限公司申请的专利一种人/动物体液中类固醇激素的定量检测方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115963199B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211647529.3，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种人/动物体液中类固醇激素的定量检测方法和应用是由李俊鹏;尹娜娜;沈珈西;胡哲;彭章晓;付艳蕾;舒烈波设计研发完成，并于2022-12-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种人/动物体液中类固醇激素的定量检测方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种人动物血浆、血清、尿液等体液中24种类固醇激素的定量检测方法，所述方法基于超高效液相色谱串联质谱法结合在线酶解‑固相萃取，可实现一次性检测24种类固醇激素游离态和结合态的总量，方法的检出限可达pgmL，方法学验证结果满足9101‑分析方法验证指导原则。本发明提供的检测方法能够同时准确定量检测人动物血浆、血清、尿液等体液中24种类固醇激素，灵敏度高，特异性强，所需样本量少，检测时间短，提高了方法的灵敏度、精密度、检测效率和检测通量，成本低廉，避免了资源浪费，为临床诊断、监测和科学研究等提供高效、强大的辅助。

本发明授权一种人/动物体液中类固醇激素的定量检测方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种人或动物体液中类固醇激素的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，制备基质混合标准工作溶液：将多种类固醇激素标准品分别加入第一溶剂超声溶解获得类固醇激素单标标准储备液，将多种类固醇激素的单标标准储备液同时加入甲醇与水的混合溶液超声溶解获得类固醇激素混合标准储备液，再取类固醇激素混合标准储备液加入第二溶剂超声溶解，获得不同浓度的混合标准溶液，最后使用质量分数为1%的BSA溶液将各浓度混合标准溶液进行稀释，得到不同浓度的基质混合标准工作溶液；步骤2，目标物提取：待测样本及不同浓度的基质混合标准工作溶液采用有机试剂蛋白沉淀法通过提取剂1、提取剂2提取分别获取上清液和蛋白沉淀；步骤3，在线酶解-固相萃取：固相萃取柱用200µL甲醇活化，再用200µL水平衡，将硫酸酯酶和β-葡萄糖醛酸酶的混合溶液加载至固相萃取柱，弃去流出液，使硫酸酯酶和β-葡萄糖醛酸酶键合在固相萃取柱的填料上，将步骤2中获取的上清液二次加载至固相萃取柱上，关闭流出阀，将其置于37℃环境下在线酶解60分钟，缓慢打开流出阀，弃去流出液，分别使用淋洗剂1、淋洗剂2淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，最后使用洗脱剂1将固相萃取柱上目标物洗脱并收集至置于玻璃进样小瓶的玻璃内衬管中，补加水至流动相初始比例并混匀，得到待测上机样本和标准测试品；步骤4，仪器分析：采用超高效液相色谱质谱联用法测定步骤3中的待测上机样本和标准测试品，根据保留时间和母-子离子对信息指认目标分析物，再根据目标分析物的选择离子对色谱峰面积通过内标标准曲线法进行定量，确定待测样品中各种类固醇激素的含量；所述液相色谱质谱联用法为超高液相色谱串联质谱联用法；所述超高液相色谱的测定条件为：色谱柱：C8液相色谱柱；柱温：45℃；进样量：5~20µL；流速：0.3mLmin；流动相A相为0.5mM氟化铵水溶液；流动相B相为甲醇；分析时间为13min；梯度洗脱；所述质谱的测定条件为：电离方式：电喷雾离子源；离子源温度为500℃；气帘气为40psi；碰撞诱导电离参数为medium；离子喷雾电压：负离子模式设定的电压为-4500V，正离子模式设定的电压为5500V；离子源Gas1:60psi；Gas2:55psi；监测方式为多反应监测MRM模式进行一、二级质谱分析；所述类固醇激素为：孕烯醇酮、17α-羟基孕烯醇酮、孕酮、17α-羟基孕酮、皮质酮、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、二氢睾酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮、睾酮、可的松、褪黑素、醛固酮、雄烯二酮、皮质醇、雄烯二醇、雄酮、表睾酮和20-羟基蜕皮酮。

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