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恭喜中国林业科学研究院亚热带林业实验中心葛晓宁获国家专利权

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龙图腾网恭喜中国林业科学研究院亚热带林业实验中心申请的专利基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119120763B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-01发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411435096.4,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法是由葛晓宁;谭新建;陈传松;曹林青;钟秋平;王金凤;周幼成;邹玉玲;袁雅琪;晏巢;郭红艳;王佳;何铁定设计研发完成,并于2024-10-15向国家知识产权局提交的专利申请。

基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法,包括以下步骤:S1:三代全长转录组测序;S2:二代转录组测序;S3:将两个三代全长转录数据在转录本ID后分别添加后缀_Co和_Cc后,合并为一套作为参考基因组,采用二代转录组样本分别和合并后的三代全长转录数据进行参照比对;S4:砧穗间mRNA双向交流的验证。本发明可以精准识别mRNA交流、分析关键基因通路,具有多层次验证机制,优化了育种策略、丰富了植物嫁接理论,且具有较强的通用性和实用性。

本发明授权基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法在权利要求书中公布了:1.基于油茶砧穗互作的交流mRNA鉴定的方法,其特征在于,包括以下具体步骤:S1:Iso-seq分析:将嫁接后90天的CoCo组合中接穗和砧木样本进行混样、嫁接后90天的CcCc组合中接穗和砧木样本进行混样后分别进行Iso-seq分析,将两组合并后作为RNA-seq的参考基因组;S2:RNA-seq分析:在嫁接后90天分别采集4个嫁接组合的叶片样本和根系样本,每个样本有3个生物学重复,分别进行RNA-seq分析;S3:砧穗间mRNA双向交流鉴定:将S1中的两个三代全长转录数据在转录本ID后分别添加后缀_Co和_Cc后,合并为一套作为参考基因组,采用S2中的二代转录组样本分别和合并后的三代全长转录数据进行参照比对;S3a:第一次筛选:筛选CcCc_root样本count为0,CoCc_root样本count不为0的基因集,即可能是Co单向向下交流的基因;S3b:第二次筛选:筛选带有“_Co”后缀的基因集,即Cc根系中本来没有,确定是从Co单向向下转移的基因;S3c:第三次筛选:排除CcCc的接穗样本中CcCc_apexcount值不为0且后缀是_Co的基因集;其次再排除CoCo的接穗CoCo_apex和砧木样本CoCo_root中count为0的基因集;S4:砧穗间mRNA双向交流的验证:S4a:将对筛选的参与植物激素信号转导、生长素生物合成通路的2个关键基因进行基因克隆、构建载体、农杆菌转化以及烟草过表达遗传转化一系列实验,所述S4a中,2个关键基因为GH3基因和UGT基因;S4b:采用湘烟7号作为遗传转化材料,待其完成遗传转化后,将转基因烟草与野生型烟草分别进行同种嫁接和互为嫁接,设置4个实验组合处理,分别是野生型烟草同种嫁接、转基因型作为接穗与野生型烟草进行嫁接、转基因型作为砧木与野生型烟草进行嫁接、转基因烟草同种嫁接;S4c:待其愈合后分别对砧木及接穗的叶片进行RT-PCR检测关键基因交流是否发生转移,使用特异性引物针对标记基因进行扩增,以证明转基因过程是否成功,所述S4c中,标记基因GFP基因;S4d:随后分别进行qRT-PCR来测定关键基因的表达量,并以GFP标签蛋白为抗体蛋白,检测与GFP相连的关键基因所转录的蛋白是否进行翻译,以此验证关键基因是否发挥功能。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国林业科学研究院亚热带林业实验中心,其通讯地址为:336600 江西省新余市分宜县城钤山西路460号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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