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龙图腾网恭喜合肥工业大学申请的专利一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115078716B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210712052.6，技术领域涉及：G01N33/569；该发明授权一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法是由叶应旺;任玉伟;曹璐璐;凌娜;沈益忠;张丹凤设计研发完成，并于2022-06-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法在说明书摘要公布了：本发明涉及一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法，属于食品安全领域。双链探针由适配体和金标探针通过DNA杂交获得，当副溶血性弧菌出现时，双链探针中的适配体与目标菌特异性结合，释放出金标探针，金标探针与捕获探针通过DNA杂交使金纳米粒子和碳点的距离明显缩短，导致碳点荧光信号猝灭。本发明中作为荧光供体的碳点具有荧光产率高、抗光漂白能力强等优势，可稳定应用于食品中。双链探针中的适配体对目标菌具有敏感的特异识别性，可高效释放金标探针从而提高对捕获探针的荧光猝灭效率，使方法的灵敏度提高至5.2cfumL。本发明检测过程中仅需简单的溶液孵育，操作步骤简便，检测时间为1.5h。综上所述，本发明在食品安全领域具有良好的应用前景。

本发明授权一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法在权利要求书中公布了：1.一种荧光猝灭型探针对副溶血性弧菌的检测方法，其特征在于，操作步骤如下：（1）被测液的制备将被检测食品切成25g的小块，在灭菌袋中与25mLpH值7.4、浓度0.1M的PBS溶液混合，通过均质机均质2min，制得PBS混合液，将PBS混合液静置5min，取上清液，得到被测液；（2）检测（2.1）首先在200μL双链探针溶液中加入100μL缓冲液，然后再加入50μL被测液，在37℃下孵育40min，得到偶联物混合液；所述双链探针由适配体和aDNA修饰的金纳米粒子制成的金标探针杂交获得；所述aDNA的DNA序列为5′-CGTGACTCCTAAAA-CH26-SH-3′；所述缓冲液为水溶液，其中含有0.117gL氯化钠和0.238025gL氯化镁，pH值为7.6；（2.2）将350μL捕获探针溶液加入到偶联物混合液中，在37℃下孵育35min，得到待测溶液；所述捕获探针由cDNA修饰的碳点制成；所述cDNA的DNA序列为5′-NH2-CH26-AGGAGTCACG-3′；（2.3）取200μL待测溶液放入比色皿中，在365nm激发波长下，利用珀金埃尔默LS-55荧光光谱仪测定待测溶液在419nm处的荧光值；（3）计算检测结果（3.1）按检测方程计算检测结果，检测方程为：-0.1091X+0.932=Y，方程中，X表示副溶血性弧菌浓度的对数值，Y为F÷F0；所述F为待测溶液在419nm处的荧光值，F0为0cfumL的副溶血性弧菌在419nm处的荧光值；（3.2）将F÷F0值代入到检测方程中，计算得出待测溶液中的副溶血性弧菌的浓度；当F÷F0的值为0.85~1.1时，待测溶液结果为阴性；当F÷F0的值小于0.85时，待测溶液结果为阳性，将小于0.85的F÷F0值带入到检测方程中即可得到待测溶液中的副溶血性弧菌的浓度；所述双链探针溶液的制备操作如下：（1）将200μL金标探针溶液和100μL浓度10μM的适配体溶液混合，加入2.5μL浓度为0.19042gL的氯化镁溶液和4μL质量分数为0.01%的吐温20溶液，在60℃条件下，静置10min，获得混合溶液；（2）将混合溶液在37℃条件下水浴1h，室温冷却20min，在转速12000rpm条件下离心20min，弃去上清，加入200μLpH值7.4、浓度0.1M的PBS溶液，制成双链探针溶液；所述金标探针溶液制备操作如下：（1）退火处理，将100μL浓度10μM的巯基修饰的aDNA溶液在95℃条件下水浴5min，在4℃条件下冷却5min，得到退火溶液；（2）在退火溶液中加入10μL浓度2.867gL的3-（2-甲酰乙基）膦盐酸盐溶液，在室温条件下，静置反应30min，得到反应物；（3）在反应物中加入1mL金纳米粒子溶液，在37℃条件下孵育12h，转速12000rpm条件下离心20min，去除上清液，得到沉淀，在沉淀中加入400μLpH值7.4、浓度0.1M的PBS溶液，获得金标探针溶液；所述捕获探针溶液的制备操作如下：（1）在室温条件下，在350μL稀释碳点溶液中加入10mg1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和5mgN-羟基琥珀酰亚胺（NHS），持续搅拌30min，获得活化碳点溶液；（2）在350μL活化碳点溶液中添加50μL浓度为10μM的cDNA溶液，在室温条件下悬浮2h，得到捕获探针溶液；所述稀释碳点溶液的制备操作如下：（1）将2g柠檬酸和2gDL-半胱氨酸混合，加入30mL超纯水，得到混合液，在超声清洗机中用100W功率超声30min，使混合液充分溶解，在180℃条件下反应1.5h；自然冷却至室温，得到棕色溶液；（2）将棕色溶液用500–1000Da纤维素透析膜透析5天，得到碳点溶液；（3）取12μL碳点溶液加入到338μL超纯水中，得到稀释碳点溶液。

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