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龙图腾网恭喜中国水产科学研究院珠江水产研究所申请的专利牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115976009B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211477089.1，技术领域涉及：C12N11/14；该发明授权牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法及其应用是由衣萌萌;王贺;卢迈新;王淼;曹建萌;刘志刚;可小丽;高风英设计研发完成，并于2022-11-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明涉及一种牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法包括以下步骤：S1、对牡蛎壳优化处理，制成改性牡蛎壳粉；S2、对步骤S1中制备的改性牡蛎壳粉固定化微生物的能力进行测试并制备填料原料；S3、通过改性牡蛎壳粉完成生物填料的制备。本发明的优点是：与生产中用的PE填料相比，经400℃和600℃高温处理后的牡蛎壳固定化益生菌生物填料在生物滤器中运行18d后，其表面微生物的群落多样性增加，并且所固定的微生物在生物膜中的相对丰度提高。表明经400℃和600℃高温处理的牡蛎适宜用于微生物的固定化材料，牡蛎壳固定化益生菌生物填料可以提高所固定微生物在属水平的相对丰度，对养殖水体具有高效的净化作用，可以应用于改善养殖水体环境。

本发明授权牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种牡蛎壳固定化益生菌生物填料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、对牡蛎壳优化处理，制成改性牡蛎壳粉；S2、对步骤S1中制备的改性牡蛎壳粉固定化微生物的能力进行测试并制备填料原料；S3、通过改性牡蛎壳粉完成生物填料的制备；所述的步骤S1为：1-1、用清水将牡蛎壳表面的泥沙附着物以及牡蛎肉渣清洗干净，然后置于烘箱干燥后在105℃下烘干2小时，经粉碎机过50-100目后形成牡蛎壳粉，存放在干燥器内备用；1-2、将牡蛎壳粉置于马弗炉中在400℃下煅烧2h，制成改性牡蛎壳粉，制成标记为OS400的改性牡蛎壳粉；另取牡蛎壳粉置于马弗炉中在600℃下煅烧2h，制成标记为OS600的改性牡蛎壳粉；未煅烧牡蛎壳粉标记为OS；所述的步骤S2为：2-1、将在30℃，200rpmmin条件下培养16h的成都假单胞菌BF6菌液，在5000rpm的转速下离心10min，通过灭菌生理盐水冲洗2-3遍后，用灭菌生理盐水重悬，配置成100-120mLOD600为0.64悬菌液；取1g灭菌OS400牡蛎壳粉和1g灭菌OS600牡蛎壳粉分别置于15ml灭菌离心管中，之后分别加入10ml菌悬液，另设不添加牡蛎壳粉的10ml菌悬液组作为对照组C组菌悬液，其中，OS400牡蛎壳粉与悬菌液的混合物形成实验组A组混合液，OS600牡蛎壳粉与悬菌液的混合物形成实验组B组混合液，每组设置3个重复；2-2、分别于第1h、6h、24h和72h取1mL的A组混合液、B组混合液和C组菌悬液，然后在300rpm离心5min，用全波长酶标仪在OD600下测定上清菌液浓度，制作吸附动力学曲线，计算不同牡蛎壳粉对益生菌的吸附能力，对成都假单胞菌BF6菌液的固定数量计算方法如下：OD＝C-T，其中，C为空白对照组OD值，T为实验组OD值；2-3、第72h后，分别将A组混合液、B组混合液和C组菌悬液在5000rpm下离心10min，弃上清；所得A组混合液、B组混合液和C组菌悬液沉淀分别用灭菌磷酸盐缓冲液漂洗后，弃PBS加入2.5％戊二醛，在4℃下固定2h形成A组样品、B组样品和C组样品；固定好的A组样品、B组样品和C组样品，经pH7.4的0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次15min；再分别经30％、50％、70％、85％、90％、95％乙醇各脱水1次，经100％乙醇脱水，每次15min，分别形成A组样品原料、B组样品原料和C组样品原料，使用扫描电子显微镜观察并分析其微观形态；所述的步骤S3为：3-1、使用电子万用电炉熔化聚丁二酸丁二醇酯，将聚丁二酸丁二醇酯分别与A组样品原料、B组样品原料和C组样品原料按照1:1的比例混合，分别制作成片状的OS生物填料、OS400生物填料和OS600生物填料，灭菌备用；3-2、将在30℃，200rpmmin的条件下培养16h的成都假单胞菌BF6和恶臭假单胞菌DS2，分别经5000rpm离心10min，灭菌生理盐水冲洗2-3遍后，用灭菌生理盐水重悬，分别配置成3000-3500mLOD600为0.5的BF6菌液和OD600为0.5的DS2菌液；3-3、取500g灭菌的OS生物填料加入300mlOD600为0.5的BF6菌液和300mLOD600为0.5的DS2菌液；在500gOS400生物填料中加入300mlOD600为0.5的BF6菌液和300mLOD600为0.5的DS2菌液；在OS600生物填料中加入300mlOD600为0.5的BF6菌液和300mLOD600为0.5的DS2菌液，置于摇床中在30℃在150rpm下孵育24小时，分别制作成OS-P生物填料、OS400-P生物填料和OS600-P生物填料。

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