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龙图腾网恭喜合肥工业大学申请的专利一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116515942B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310411278.7，技术领域涉及：C12Q1/06；该发明授权一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法是由叶应旺;李辉;凌娜;任玉伟;陈韩芳;赵文华;李龙;张丹凤;沈益忠设计研发完成，并于2023-04-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法，属于食品安全技术领域。可视化检测操作步骤如下：（1）制备食物溶液；（2）制备被检测液，将食物溶液与比率荧光探针按比例混合，孵育，得到被检测液；（3）对被检测液检测，通过RGB图像仪测定被检测液在激发波长285nm下避光产生的图像，将图像进行RGB色值的读取，选择以读取的RGB色值中B值与G值之间的比值作为纵坐标，以含菌检测液的菌浓度的对数值作为横坐标，绘制标准曲线，根据线性回归方程得到相关系数与检出限。本检测方法的线性拟合系数为0.98945，检出限低至6.31CFUmL。可在食品样品检测现场来快速获取单增李斯特菌的真实浓度。

本发明授权一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法在权利要求书中公布了：1.一种比率荧光探针对食源性单增李斯特菌的可视化检测方法，其特征在于，操作步骤如下：（1）制备食物溶液在被检测食物中接种人工接种单增李斯特菌，制得食物溶液；所述被检测食物为自来水、橙汁、牛奶、熟牛肉、生菜，所述食物溶液为自来水溶液、橙汁溶液、牛奶溶液、熟牛肉溶液、生菜溶液；（2）制备被检测液按照体积1：1将比率荧光探针与步骤（1）得到的食物溶液混合，孵育25min，得到被检测液；所述比率荧光探针由作为能量供体的第一荧光探针和作为能量受体的第二荧光探针按体积比1：1混合均匀制成；所述第一荧光探针为万古霉素修饰的碳量子点；所述第二荧光探针为适配体修饰的硅纳米颗粒；所述适配体的DNA序列如SEQIDNo:1所示，所述适配体的5’端用氨基修饰；所述比率荧光探针中，万古霉素修饰的碳量子点的荧光发射波长为458nm，适配体修饰的硅纳米颗粒的荧光发射波长为488nm；（3）对被检测液进行检测将步骤（2）得到的被检测液，通过红绿蓝三色图像仪测定所述被检测液在激发波长285nm下避光产生的图像，将所述图像进行红绿蓝色值的读取；选择以读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值作为纵坐标，并以被检测液的菌浓度的对数值作为横坐标，绘制标准曲线，根据线性回归方程得到相关系数与检出限；所述自来水的线性拟合系数为0.98211，其检出限为6.31CFUmL；对于自来水溶液，其读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值大于1.85时，自来水中未检出单增李斯特菌；所述比值小于1.85时，自来水中含有单增李斯特菌，将比值带入所述线性回归方程中即可得到自来水溶液中单增李斯特菌的浓度；所述橙汁的线性拟合系数为0.98090，其检出限为8.51CFUmL；对于橙汁溶液，其读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值大于1.91时，橙汁中未检出单增李斯特菌；所述比值小于1.91时，橙汁中含有单增李斯特菌，将比值带入所述线性回归方程中即可得到橙汁溶液中单增李斯特菌的浓度；所述牛奶的线性拟合系数为0.98242，其检出限为8.93CFUmL；对于牛奶溶液，其读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值大于1.90时，牛奶中未检出单增李斯特菌；所述比值小于1.90时，牛奶中含有单增李斯特菌，将比值带入所述线性回归方程中即可得到牛奶溶液中单增李斯特菌的浓度；所述熟牛肉的线性拟合系数为0.98945，其检出限为15.09CFUmL；对于熟牛肉溶液，其读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值大于1.97时，熟牛肉中未检出单增李斯特菌；所述比值小于1.97时，熟牛肉中含有单增李斯特菌，将比值带入所述线性回归方程中即可得到熟牛肉溶液中单增李斯特菌的浓度；所述生菜的线性拟合系数为0.97770，其检出限为9.60CFUmL；对于牛奶溶液，其读取的红绿蓝色值中蓝色值与绿色值之间的比值大于2.03时，牛奶中未检出单增李斯特菌；所述比值小于2.03时，牛奶中含有单增李斯特菌，将比值带入所述线性回归方程中即可得到牛奶溶液中单增李斯特菌的浓度；步骤（2）中，所述比率荧光探针的制备操作如下：（2.1）制备活化混合液按体积比1：1，将浓度10mM的1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐与浓度5mM的N-羟基琥珀酰亚胺混合，得到活化混合液；（2.2）制备第一荧光探针按质量体积比12mg：2mL将盐酸胍与超纯水混合溶解，得到混合液；将混合液转移至反应釜中，反应温度200℃、反应时间8h，冷却至室温，得到反应液；在转速8000rpm、温度4℃条件下，将反应液离心20min，收集上清液；按照体积比2：1将上清液与所述活化混合液混合，室温下孵育25min；加入浓度50uM的万古霉素溶液，万古霉素溶液的加入量为所述上清液体积的0.006倍，在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第一荧光探针；（2.3）制备第二荧光探针按体积比1：1将摩尔浓度100mM的抗坏血酸钠溶液与3-氨丙基三甲氧基硅烷混合，并加入八倍体积的超纯水搅拌混匀，搅拌混匀80min；以500Da透析袋透析18h，得到滞留液，得到滞留液并稀释十五倍；按体积比2：1将滞留液与所述活化混合液进行混合，室温下孵育30min；加入浓度100uM的适配体溶液，适配体溶液的加入量为所述滞留液体积的0.03倍；在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第二荧光探针；（2.4）制备比率荧光探针按体积比1：1将所述第一荧光探针与所述第二荧光探针混合，制得比率荧光探针；当碳量子点的荧光发射波长从452nm偏移至458nm，表示比率荧光探针中万古霉素成功修饰到碳量子点上，当硅纳米颗粒的荧光发射波长从500nm偏移至488nm，表示比率荧光探针中适配体成功修饰到硅纳米颗粒上。

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