恭喜吉林国健生命工程科学技术有限公司吴昊获国家专利权
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龙图腾网恭喜吉林国健生命工程科学技术有限公司申请的专利一种NK细胞的规模化培养方法及采用的培养基获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119286781B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411834436.0,技术领域涉及:C12N5/0783;该发明授权一种NK细胞的规模化培养方法及采用的培养基是由吴昊;窦柏蕊;闫璐;张亚超;冯悦;周云竹;赵越设计研发完成,并于2024-12-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种NK细胞的规模化培养方法及采用的培养基在说明书摘要公布了:本发明提出了一种NK细胞的规模化培养方法及采用的培养基,属于NK细胞培养技术领域。在ACTM培养基中加入胎牛血清、青霉素、链霉素、刺激扩增促进磁性微球,搅拌混合均匀,制得培养基。本发明提供了一种NK细胞的规模化培养方法,能够高效激活扩增NK细胞、无自体血清使用、安全有效,能够较好的促进NK细胞增殖,延长其活力,且安全无副作用,具有广阔的应用前景。
本发明授权一种NK细胞的规模化培养方法及采用的培养基在权利要求书中公布了:1.一种培养基,其特征在于,在ACTM培养基中加入胎牛血清、青霉素、链霉素、刺激扩增促进磁性微球,搅拌混合均匀,制得培养基;所述刺激扩增促进磁性微球的制备方法如下:S1.将氯化铁、氯化亚铁和亲水乳化剂溶于水中,制得水相;将正硅酸烷基酯、亲油乳化剂溶于乙酸乙酯中,制得油相;将水相滴加入油相中,乳化,滴加氨水,加热搅拌反应,离心,洗涤,干燥,煅烧,制得包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球;所述氯化铁、氯化亚铁、亲水乳化剂、正硅酸烷基酯、亲油乳化剂的质量比为3.24:1.26:0.2-0.5:3-5:0.1-0.2;所述滴加氨水调节溶液pH值为9-10,所述加热搅拌反应的温度为70-80℃,时间为4-7h,所述乳化的转速为5000-8000rmin,时间为15-25min,所述干燥的温度为60-70℃,时间为2-4h,所述煅烧的温度为500-700℃,时间为1-2h;S2.将包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球加入水中,加入单宁酸和催化剂,加热搅拌反应,磁铁分离,洗涤,干燥,制得改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球;所述包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球、单宁酸和催化剂的质量比为10:3-4:0.5-1;所述催化剂的pH值为8.5-9.5的Tris-HCl溶液,所述加热搅拌反应的温度为40-50℃,时间为3-5h;S3.将改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球加入水中,加入NHS和EDC,搅拌活化,加入藻蓝蛋白和丝素蛋白肽,搅拌反应,磁铁分离,洗涤,冷冻干燥,制得蛋白偶联改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球;所述改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球、NHS、EDC、藻蓝蛋白和丝素蛋白肽的质量比为10:2-3:1-3:2-3:4-5,所述搅拌活化的时间为20-30min,所述搅拌反应的时间为10-12h;S4.将蛋白偶联改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球加入水中,加入NHS和EDC,搅拌活化,加入细胞复合因子,搅拌反应,磁铁分离,洗涤,冷冻干燥,制得刺激扩增促进磁性微球;所述蛋白偶联改性包覆磁性四氧化三铁的二氧化硅球、NHS、EDC和细胞复合因子的质量比为10-12:2-3:1-3:4-5,所述细胞复合因子为IL-15和IL-12,质量比为10:3-7;所述搅拌活化的时间为20-30min,所述搅拌反应的时间为8-10h。
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