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龙图腾网恭喜海南热带海洋学院申请的专利一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型及其制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119410572B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510033396.8，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型及其制备方法是由曾小娜;陈燕;黄海;谢青梅;陈胜;潘延曦;刘茜瑶;谢明馨设计研发完成，并于2025-01-09向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型及其制备方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型及其制备方法，属于水产养殖类器官技术领域。其制备方法包括以下步骤：将斑马鱼肠道样本置于含五抗的PBS中分离清洗，得到肠道组织；将肠道组织先于分离液中涡旋振荡，弃去分离液，然后于螯合液中涡旋振荡，过滤，得到斑马鱼隐窝细胞悬液；对细胞悬液进行差速离心，沉淀重悬于DMEM培养基中，得到肠道器官隐窝悬液；先将隐窝悬液滴胶接种于斑马鱼肠道类器官培养基和基质胶混合液中进行体外培养，制得。本发明解决了现有缺乏出芽率高、效果好的斑马鱼肠道类器官体外模型制备方法的问题，为基于斑马鱼肠道类器官的肠病分子机制研究、疾病模拟和药效筛选等提供研究工具，具有良好的应用价值。

本发明授权一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型及其制备方法在权利要求书中公布了：1.一种斑马鱼肠道类器官体外培养立体模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将斑马鱼肠道样本置于含五抗的PBS中分离清洗，得到肠道组织；（2）将步骤（1）所得肠道组织先于分离液中涡旋振荡，弃去分离液，然后于螯合液中涡旋振荡，过滤，得到斑马鱼隐窝细胞悬液；（3）对步骤（2）所得斑马鱼隐窝细胞悬液进行差速离心，将沉淀重悬于DMEM培养基中，得到肠道器官隐窝悬液；（4）先将步骤（3）所得肠道器官隐窝悬液滴胶接种于斑马鱼肠道类器官培养基和基质胶混合液中进行体外培养，制得；其中，斑马鱼肠道类器官培养基包括以下组分：DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素链霉素双抗、Wnt-3a、EGF、R-spondin-1、Noggin、p38MAPK抑制剂和N-AcetyI；所述步骤（2）中分离液为氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和L-Glu的混合水溶液，其中，氯化钠的浓度为6-10gL，氯化钾的浓度为0.1-0.3gL，磷酸二氢钾的浓度为0.1-0.3gL，磷酸氢二钠的浓度为0.4-0.8gL，L-Glu的浓度为0.2-0.4gL；所述步骤（2）中螯合液为浓度5-15gL的EDTA-2Na溶液；所述步骤（4）中斑马鱼肠道类器官培养基中DMEM高糖培养基占总培养基体积的40-60%，胎牛血清占总培养基体积的5-15%，Wnt-3a占总培养基体积的30-50%，EGF的浓度为0.02-0.06μgmL，R-spondin-1的浓度为0.2-0.6μgmL，Noggin的浓度为0.06-0.1μgmL，p38MAPK抑制剂的浓度为8-12μmolL，N-AcetyI的浓度为0.8-1.2mmolL；斑马鱼肠道类器官培养基和基质胶按体积比为1：1混合均匀，得到混合液，滴胶接种时每1μL混合液中加入3个肠道器官隐窝，滴胶的体积为50μL滴，接种密度为7滴孔。

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