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龙图腾网恭喜北赛泓升(北京)生物科技有限公司申请的专利人多能干细胞分化来源的软骨微组织的制备方法及用途获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118109397B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211522543.0，技术领域涉及：C12N5/077；该发明授权人多能干细胞分化来源的软骨微组织的制备方法及用途是由请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名设计研发完成，并于2022-11-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本人多能干细胞分化来源的软骨微组织的制备方法及用途在说明书摘要公布了：提供了制备人多能性干细胞分化来源的软骨微组织的制备方法及用途。本文所述的软骨细胞微组织包含人多能性干细胞分化来源的软骨细胞和其分泌的细胞外基质蛋白，并且与成体原代软骨细胞相比具有更高的细胞外基质蛋白COL2A1、ACAN、COL9A1、SPARC、COL11A1和SOX9表达量和相似的HAPLN1表达量，并且降低的MFAP5表达。本文所述的软骨细胞微组织比目前市场上自体软骨细胞产品具有更高的软骨细胞外基质相关基因COL2A1、ACAN、SOX9、COL9A1、COL11A1、SPARC和透明软骨细胞标志物基因HAPLN1表达量，以及更低的纤维软骨细胞标志物基因MFAP5表达量。

本发明授权人多能干细胞分化来源的软骨微组织的制备方法及用途在权利要求书中公布了：1.制备软骨细胞微组织的方法，其包括：A1将iPS细胞分化为软骨前体细胞，其中软骨前体细胞对于CD73、CD90、CD105和CD44呈阳性，并且对于CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45和HLADR呈阴性；B1在软骨前体细胞培养基中以3D细胞培养方式静置培养软骨前体细胞，以聚集形成单独的球体或类球体，其中软骨前体细胞培养基由DMEM高糖培养基、1%-10%Knockout血清替代品、10-40ngmlEGF和10-40ngmlFGF2组成；C1将软骨前体细胞培养基更换为软骨细胞微组织培养基并且静置培养单独的球体或类球体1-28天，其中软骨细胞微组织培养基由DMEM高糖培养基、0.5%-10%Knockout血清替代品、0.5%-10%的胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、0.5-10mM丙酮酸钠、50-200UmL青霉素、50-200μgmL链霉素、0.05-1mM抗坏血酸钠、0.05-1uM地塞米松、10-100μgmL脯氨酸、10-100ngmLTGF-β3和10-100ngmLBMP2组成；以及D1在软骨细胞微组织培养基中摇动培养悬浮的单独的球体或类球体，直至获得软骨细胞微组织；其中步骤A1包括：1在诱导iPS细胞分化的培养基中培养iPS细胞20-28小时，该培养基包含DMEMF12培养基并且包含0.5-5%青霉素、0.5-5%链霉素、0.5-5%ITS-A、1-10%B27、0.5-5%NEAA和50-200μMβ-巯基乙醇；2在10-50ngmLWNT3a和50-100ngmLActivinA的存在下诱导20-28小时；3在10-50ngmLWNT3a、10-50ngmLActivinA和10-50ngmLFGF2的存在下诱导20-28小时；4在10-50ngmLWNT3a、5-50ngmLActivinA、10-50ngmLFGF2及20-80ngmLBMP4的存在下诱导20-28小时；5在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLBMP4、1-10ngmLNT4及100ngmLFollistatin的存在下将细胞进行传代，并且培养3-5天；6在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLBMP4及1-10ngmLNT4的存在下诱导20-28小时；7在10-50ngmLFGF2、10-50ngmLBMP4、10-50ngmLGDF5、1-10ngmLNT4及5-50ngmLTGFβ3的存在下将细胞进行传代，并且培养1-3天；和8在10-50ngmLFGF2、20-80ngmLGDF5、1-10ngmLNT4及5-50ngmLTGFβ3的存在下将细胞培养3-6天；然后将细胞传代15代以上，得到软骨前体细胞。

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