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龙图腾网恭喜中国医学科学院输血研究所申请的专利基于三代测序的RHD、RHCE mRNA全长的测定方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115851895B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211659889.5，技术领域涉及：C12Q1/6869；该发明授权基于三代测序的RHD、RHCE mRNA全长的测定方法及试剂盒是由刘忠;王珏;官笑羽;纪欣设计研发完成，并于2022-12-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于三代测序的RHD、RHCE mRNA全长的测定方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本发明公开了基于三代测序的RHD、RHCEmRNA全长的测定方法及试剂盒，属于生物技术领域，解决现有技术不能测定RHD、RHCEmRNA全长，不能检测低水平剪切体、不能对转录本相对定量的问题。本发明测定方法包括：mRNA的抽提及cDNA逆转录；PCR扩增；三代测序文库构建及上机测序；测序数据过滤与质控；转录本的表达量分析。本发明的试剂盒包括有同时扩增RHD、RHCE转录本全长的引物。本发明成功利用长链单分子测序技术对RHD、RHCE基因进行全长转录本测序，检测出RhD阳性和Del型样本中RHD、RHCE基因的多种转录本，并可对不同转录本的表达水平进行相对定量，为揭示RH血型变异的分子机制提供了新方法。本发明的同步检测方法可以一步得到两个基因的结果，简化了实验流程，丰富检测结果。

本发明授权基于三代测序的RHD、RHCE mRNA全长的测定方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.一种基于三代测序的RHD、RHCEmRNA全长的测定方法，其特征在于，所述测定方法用于测定RHD、RHCEmRNA的全长及转录本的表达量分析，所述测定方法包括以下步骤：S1.mRNA的抽提及cDNA逆转录：提供不同样本的mRNA，再逆转录成cDNA；S2.PCR扩增：设计能同时扩增RHD、RHCEmRNA全长的扩增引物，采用该引物对步骤S1所得的cDNA进行扩增；所述引物的核苷酸序列为：上游：5’-GCACAGAGACGGACACAGGATG-3’；下游：5’-GCAGGCAACAGTGAGAGGAAGT-3’；S3.三代测序文库构建及上机测序：将步骤S2所得的PCR产物纯化、定量、末端修复、连接标签、添加测序接头后再次纯化，完成文库的构建；将上述cDNA测序文库经三代测序平台测序；S4.测序数据过滤与质控：对测序所得的短片段和低质量数据进行剪切与过滤，以及去除50bp接头序列得到有效数据，过滤条件为200bp＜所测序列长度＜3000bp，测序质量Qscore＞7；最后再对过滤后的有效数据进行质控，得到RHD、RHCEmRNA全长信息；所述测定方法还包括转录本的表达量分析，步骤具体为：S5.根据所测转录本与Ensembl数据库人类参考基因组GRCh38（hg38）gtf文件进行比对；采用每千个碱基的转录和每百万映射读取的转录本数TPM作为衡量转录本或基因表达水平的指标，TPM计算公式如下：TPMi=NiLi∗1000000sumNiLi+……+NmLmTPMi：基因i的TPM；Ni：基因i上的read数；Li：基因i的外显子长度总和；sumNiLi+……+NmLm为所有m个外显子按长度进行标准化之后数值的和；定量每个样本各转录本的TPM和NumReads。

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