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龙图腾网恭喜山东泓达生物科技有限公司;山东昆达生物科技有限公司申请的专利一株高效生产依克多因的基因工程菌及其制备和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116987649B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310339081.7，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一株高效生产依克多因的基因工程菌及其制备和应用是由熊传波;杜敬彩;刘瑞艳;严立恩;陆敏设计研发完成，并于2023-04-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本一株高效生产依克多因的基因工程菌及其制备和应用在说明书摘要公布了：本发明提出了一株高效生产依克多因的基因工程菌及其制备和应用，其特征在于，所述基因工程菌以大肠杆菌MG1655，编号为ATCC47076为宿主，其包含如下改造：基于丙酮酸响应转录因子PdhR，在T7启动子的下游通过融合PCR的方法插入PdhR结合位点PdhRBox，使其转录受到丙酮酸响应转录因子PdhR抑制，利用试剂盒ClonExpress通过无缝克隆的方法构建得到受丙酮酸调控的Ppr启动子；外源引入T7RNAP，在PxylF下表达；外源引入密码子优化的ectABC基因簇，一个拷贝在T7启动子下，另一个拷贝在构建的受丙酮酸调控的强启动子Ppr启动子下；在Ppr控制下增量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ppc和天冬氨酸激酶基因lysC；通过反义转录抑制thrA、lysA、iclR和zwf基因的表达。本申请工程菌能够生产依克多因，并具有较高的产量。

本发明授权一株高效生产依克多因的基因工程菌及其制备和应用在权利要求书中公布了：1.一株高效生产依克多因的基因工程菌，所述基因工程菌以大肠杆菌MG1655，编号为ATCC47076为宿主，其特征在于，A）基于丙酮酸响应转录因子PdhR，在T7启动子的下游通过融合PCR的方法插入PdhR结合位点PdhRBox，使其转录受到丙酮酸响应转录因子PdhR抑制，利用试剂盒ClonExpress通过无缝克隆的方法构建得到受丙酮酸调控的Ppr启动子；B）外源引入T7RNAP，在PxylF下表达；C）外源引入密码子优化的ectABC基因簇，一个拷贝在T7启动子下，另一个拷贝在构建的受丙酮酸调控的强启动子Ppr启动子下；在Ppr控制下增量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ppc和天冬氨酸激酶基因lysC；D）通过反义转录抑制thrA和lysA的表达，减少苏氨酸、蛋氨酸、赖氨酸代谢支路的流量并减少其反馈抑制；通过反义转录抑制iclR基因的表达，激活乙醛酸途径，提高重要的前体草酰乙酸的积累；通过反义转录抑制zwf基因的表达，减少6-磷酸葡萄糖到HMP途径的代谢流量；所述密码子优化的ectABC基因簇将原始外源基因ectABC基因簇序列通过成型的规则修改部分密码子，使其适合大肠杆菌表达的方法，最终人工合成出密码子的DNA片段ectOPT；所述密码子优化的ectABC基因簇为ectOPT，其核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1所示；所述T7启动子的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.2所示；T7终止子的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.3所示；所述PxylF基因的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.5所示；所述RNAP基因的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.6所示；所述thrA基因的GeneID为945803，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.11所示；所述lysA基因的GeneID为947313，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.12所示；所述iclR基因的GeneID为948524，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.13所示；所述zwf基因的GeneID为946370，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.14所示；所述ppc基因的GeneID为948457，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.15所示；所述lysC基因的GeneID为948531，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.16所示；所述PdhR基因的GeneID为944827，核苷酸序列为序列表SEQIDNo.17所示；所述Ppr启动子的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.18所示。

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