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龙图腾网恭喜浙江大学海南研究院申请的专利基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118620950B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411103031.X，技术领域涉及：C12N15/82；该发明授权基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法是由郭芾;曾文卓;舒庆尧设计研发完成，并于2024-08-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法在说明书摘要公布了：本发明公开了基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法，包括：选择gRNA靶位点；克隆含有gRNA的串联片段；连接各gRNA片段；对连接产物进行PCR扩增；纯化产物和目标载体的酶切；转化；农杆菌介导的水稻转基因；转基因植株的筛选与鉴定。选择gRNA靶位点具体包括如下步骤：根据CRISPR‑Cas9技术的靶位点设计原则；在靠近OsLEC1基因5’端的基因序列上设计2个gRNA靶位点。克隆含有gRNA的串联片段具体包括如下步骤：以质粒pGTR为模板。在本发明中，愈伤组织的分化直接影响了转基因的出苗效率，OsLEC1的敲除可以促进水稻愈伤组织的分化，提示它可能作为一个提高水稻乃至禾本科作物转化效率的一个重要靶标基因，可以以它为出发点来构建各种分子工具提高转化效率。

本发明授权基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法在权利要求书中公布了：1.敲除OsLEC1基因在促进水稻愈伤组织分化中的应用，其特征在于，包括：S1、选择gRNA靶位点；S2、克隆含有gRNA的串联片段；S3、连接各gRNA片段；S4、对连接产物进行PCR扩增；S5、纯化产物和目标载体的酶切；S6、转化；S7、农杆菌介导的水稻转基因；S8、转基因植株的筛选与鉴定；所述OsLEC1基因如序列1所示；所述促进水稻愈伤组织分化的测试方法如下：A1、取野生型和敲除OsLEC1突变体的鲜种子各30粒，去壳，用70%酒精消毒3分钟，30%次氯酸钠溶液消毒10分钟；A2、之后用无菌水冲洗6次后，平铺在愈伤诱导培养基上，在28℃光照培养箱培养1个月；A3、当出现颗粒型愈伤组织后，将其继代到新的愈伤诱导培养基上20天扩大繁殖，之后挑取生长状态良好并大小接近的愈伤组织颗粒放置在分化培养基上，30天拍照并统计出芽率；愈伤组织诱导培养基的配方为3.859gN6培养基粉末、2mL浓度为1mgml2,4-D、2.8gL-脯氨酸、0.5g酪水解酶素、30g蔗糖和4.5g植物凝胶，且愈伤组织诱导培养基PH值为5.8；愈伤组织分化培养基的配方为4.47gMS粉末、3mL浓度为1mgml6-BA、0.5mL1mgmlNAA、20g山梨醇、30g蔗糖和4.5g植物凝胶，且愈伤组织分化培养基PH值为5.5。

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