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龙图腾网恭喜西南大学申请的专利一种免标记比率荧光型检测抗原方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114594270B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210281600.4，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权一种免标记比率荧光型检测抗原方法是由凌玉;罗红群;李念兵设计研发完成，并于2022-03-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种免标记比率荧光型检测抗原方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种免标记比率荧光型检测抗原方法。本发明包括以下步骤：设计一条单链DNA，包含对CRISPR的识别DNA序列，目标抗原的适配体，两者通过数个连续的T碱基间隔，构建出组分A；以目标抗原作为靶标，在96孔板上修饰目标抗原的抗体，构建出组分B；将表面羧基化的二氧化硅微球与末端修饰有氨基的DNA链相连，辅助DNA与有氨基的DNA互补配对形成双链，构建出组分C；将待检测物中加入组分A、组分B、组分C、铜离子和抗坏血酸、DAPI染料、核酸外切酶III；检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光，以比率荧光法进行目标抗原检测。本发明比率荧光法比较两种荧光的强度作为信号参数，更准确、灵敏度更高、选择性更好；且提高了灵敏度、克服了传统方法需要标记抗体的缺点，节约了检测成本。

本发明授权一种免标记比率荧光型检测抗原方法在权利要求书中公布了：1.一种免标记比率荧光型检测抗原方法，其特征在于，包括以下步骤：对包含有CRISPR的识别DNA序列的单链进行设计，使其包含一段目标抗原的适配体，并通过数个连续的T碱基与识别DNA序列间隔，构建出组分A；以目标抗原作为靶标，在96孔板上修饰目标抗原的抗体，并用牛血清白蛋白来封闭非特异性结合位点，构建出组分B；适配体与目标抗原结合后，CRISPRCas12a被固定在目标抗原表面并被激活，激活后可以剪切一切单链为2-4个碱基的片段，此时加入polyT和primerDNA，均会被剪成碎片；将表面羧基化的二氧化硅微球与末端修饰有氨基的DNA链相连，另一条辅助DNA与修饰有氨基的DNA链互补配对形成双链，构建出组分C；另一条辅助DNA与修饰有氨基的DNA链互补配对形成双链，此双链具有粘性末端，DAPI染料会嵌入双链，从而发出强的蓝色荧光，未嵌入双链的DAPI荧光很弱；将待检测物中加入组分A和组分B和组分C和铜离子和抗坏血酸和DAPI染料和核酸外切酶III；检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光，以比率荧光法进行目标抗原检测；体系中存在目标抗原，则CRISPRCas12a会被固定，即不存在polyT和primerDNA，不存在polyT，则无法合成Cu纳米簇，红色荧光弱；不存在primerDNA，则核酸外切酶III无法剪切二氧化硅微球上的双链，DAPI的荧光强。

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