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龙图腾网恭喜华南理工大学;广东华南新药创制中心申请的专利一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119177264B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411689537.3，技术领域涉及：C12P19/30；该发明授权一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法是由杨继国;周于群;唐语谦设计研发完成，并于2024-11-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法在说明书摘要公布了：本发明公开一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法。该方法在最佳条件：25mgmLEBY‑NRK、10mgmLEBY‑PPK、5mMNR、1.5mMATP、15mM磷酸供体、2mM含Mg2+物质，30℃、pH6.5下可以催化生成82.8%NMN，ATP成本下降75%，全细胞酶制剂重复利用5次后仍保留＞50%酶活。本发明还开发了一种重组酵母表面展示的全细胞催化剂，通过偶联ATP再生系统解决了NMN生物合成过程中副产物积累反馈抑制转化的问题，获得了良好的NMN产物生成率的同时有效降低了成本。

本发明授权一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法在权利要求书中公布了：1.一种双酶“一锅法”催化生产烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建两株重组酿酒酵母表面展示菌株；S2、分别培养S1中构建的两株重组酿酒酵母表面展示菌株，在培养基培养后，离心收集菌体细胞，冻干后分别得到EBY-NRK全细胞酶制剂和EBY-PPK全细胞催化剂；S3、将EBY-NRK全细胞酶制剂、EBY-PPK全细胞催化剂、烟酰胺核糖NR、三磷酸腺苷ATP、磷酸供体和含Mg2+物质混合反应生成NMN；S1中，所述构建两株重组酿酒酵母表面展示菌株中，以质粒pYD1为载体过表达烟酰胺核苷激酶和多聚磷酸激酶；S1具体为：将烟酰胺核苷激酶基因插入质粒载体pYD1上，构建重组质粒pYD1-NRK，转入酿酒酵母EBY100，实现重组烟酰胺核苷激酶在酿酒酵母的表面展示，得到重组酿酒酵母EBY100pYD1-NRK，所述的烟酰胺核苷激酶基因如SEQIDNO：1所示；将多聚磷酸酶基因插入质粒载体pYD1上，构建重组质粒pYD1-PPK，将质粒转入酿酒酵母EBY100，实现重组多聚磷酸酶在酿酒酵母的表面展示，得到重组酿酒酵母EBY100pYD1-PPK，所述的多聚磷酸酶基因如SEQIDNO：2所示；步骤S3中，反应体系中EBY-NRK全细胞酶制剂添加量为20-25mgmL；EBY-PPK全细胞催化剂添加量为10-15mgmL；烟酰胺核糖NR的添加量为5-7mM；三磷酸腺苷ATP的添加量为1-2mM；磷酸供体的添加量为10-15mM；含Mg2+物质的添加量为2-5mM，所述含Mg2+物质为MgCl2；步骤S3中，反应体系中EBY-NRK全细胞酶制剂添加量为25mgmL；EBY-PPK全细胞催化剂添加量为10mgmL；烟酰胺核糖NR的添加量为5mM；三磷酸腺苷ATP的添加量为1.5mM；磷酸供体的添加量为15mM；含Mg2+物质的添加量为2mM，所述含Mg2+物质为MgCl2；步骤S3中，所述磷酸供体为偏六磷酸钠；步骤S3中，所述反应为：25-30℃、180-200rpm、pH6.0-7.0条件下反应3-6小时；S2中，所述培养基为Sc液体培养基，所述Sc液体培养基中包含1.5wt%-2.5wt%葡萄糖或2wt%-2.5wt%半乳糖、0.67wt%-1.34wt%酵母无氨基氮源和2wt%-2.5wt%酸水解酪蛋白；S2中，所述培养的条件为：在含葡萄糖Sc液体培养基中，在28-30℃、180-200rpm条件下培养18-22h后，转至含半乳糖Sc液体培养基中，在20-25℃诱导培养60-72h；S2中，所述离心为：5000～9000rpm，0～8℃条件下离心8～10min。

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