恭喜宁夏大学郑蕊获国家专利权
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龙图腾网恭喜宁夏大学申请的专利一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118185986B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410255585.5,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法是由郑蕊;徐明月;杨立明;刘雪霞;冯睿;高寒;岳思君设计研发完成,并于2024-03-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法,涉及植物基因工程技术领域。本发明公开的发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法,将宁夏枸杞幼苗下胚轴处用无菌刀片划伤,将切口处接种于活化后的携带目的基因重组质粒35S::eGFP或pRI101‑LbbHLH36‑eGFP的发根农杆菌K599菌液中,培养得到宁夏枸杞转基因植株。诱导获得的宁夏枸杞转基因荧光毛状根中rolB、NeoR、eGFP、LbbHLH36基因均能扩增出条带,表明以上均为发根农杆菌诱导的转基因毛状根,用该体系将目的基因转入宁夏枸杞根系中是快速可行的。
本发明授权一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法在权利要求书中公布了:1.一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法,其特征在于,包括:1)将宁夏枸杞种子消毒后培养至萌发获得幼苗,将幼苗下胚轴处用无菌刀片进行划伤;2)通过冻融法将携带目的基因的重组质粒转入发根农杆菌中,制备菌液;3)将发根农杆菌甘油菌进行划平板培养,挑取单菌落进行PCR验证,将PCR验证阳性的单菌落用无菌枪头点到新的含50mgL硫酸卡那霉素和25mgL硫酸链霉素的LB固体培养基上于28℃生长24~36h备用;4)将宁夏枸杞幼苗下胚轴处用无菌刀片进行划伤,将切口处接种于活化后的发根农杆菌中进行侵染;5)将侵染后的宁夏枸杞幼苗在16h8h光周期下培养3周,培养温度23~25℃;6)用手持式荧光观测仪进行观测,提取诱导出的有荧光的毛状根基因组DNA并进行目的基因的扩增;所述发根农杆菌为K599发根农杆菌;所述K599发根农杆菌菌液的活化方法为通过冻融法将携带目的基因的重组质粒转入发根农杆菌K599中,挑取验证阳性的单克隆至含有50mgL硫酸卡那霉素和25mgL硫酸链霉素的LB液体培养基中,28℃、200rpm震荡培养16-24h,得到活化后的发根农杆菌K599菌液;所述目的基因为eGFP基因、LbbHLH36基因;所述eGFP基因的重组质粒为35S::eGFP;所述LbbHLH36基因的重组质粒为pRI101-LbbHLH36-eGFP。
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