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龙图腾网恭喜重庆大学申请的专利一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115925831B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-02-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211185425.5，技术领域涉及：C07K14/195；该发明授权一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法是由陈猷鹏;王谨;晏鹏;傅慧敏;方芳;郭劲松设计研发完成，并于2022-09-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法，先对K.SBfr基因进行扩增，再经克隆和表达后得到菌体，然后用裂解液悬浮，超声裂解，经离心收集上清液，再经两次分离纯化即得到细菌铁蛋白，包括：将凝胶与上清液混合后装入亲和层析柱空柱管中，再依次采用含100mM、200mM、400mM、600mM的NaCl溶液的洗涤缓冲液进行梯度洗涤；再采用洗涤液进行至少5次洗涤，然后采用洗脱液进行洗脱，即得到细菌铁蛋白混合液；采用超滤管对细菌铁蛋白混合液进行浓缩，然后采用分子筛层析柱分离即得到组装好的球状细菌铁蛋白。该方法能将厌氧氨氧化菌属CandidatusKueneniastuttgartiensis细菌的细菌铁蛋白纯化出来，从而为研究厌氧氨氧化细菌铁蛋白的结构和功能提供技术支持。

本发明授权一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法在权利要求书中公布了：1.一种厌氧氨氧化细菌的细菌铁蛋白的分离纯化方法，其特征在于，先对K.SBfr基因进行扩增，经克隆和表达后得到菌体，然后用裂解液悬浮，超声裂解，然后离心，收集上清液，最后进行两次分离纯化即得到细菌铁蛋白；所述K.SBfr基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；克隆和表达操作如下：将扩增K.SBfr基因与克隆载体pET-28a+连接，得到K.SBfr克隆质粒；再将K.SBfr克隆质粒转入BL21DE3中，然后在含有卡那霉素的LB培养基中活化培养，再移至新鲜LB培养基中进行扩增培养，待菌液OD600值为0.6~0.8时，向菌液中加入诱导剂进行诱导培养，最后收集菌体；且细菌扩增培养时，在菌液中还添加有硫酸亚铁和血红素，以增加K.SBfr的自组装能力；所述细菌铁蛋白分离纯化包括以下步骤：S1一次纯化将凝胶与上清液混合后，在4℃摇床上孵育至少1h，然后装入亲和层析柱空柱管中，再依次采用含100mM、200mM、400mM、600mM的NaCl溶液的洗涤缓冲液进行浓度梯度洗涤；再采用洗涤液进行至少5次洗涤，然后采用洗脱液进行洗脱，即得到细菌铁蛋白混合液；所述凝胶为His-tagPurificationResin；所述洗脱液的配置为：25~50mMTris-HCl缓冲液，pH7.5~8.0，25~100mMNaCl，20~500mM咪唑，浓度为25~50mM精氨酸；S2二次纯化采用含有精氨酸的透析缓冲液对一次纯化后的细菌铁蛋白进行透析，然后采用超滤管对细菌铁蛋白混合液进行浓缩，最后采用分子筛层析柱分离，即可得到自组装的球状细菌铁蛋白；所述分子筛层析柱缓冲液体系为50mMNaH2PO4，100mMNaCl，pH7.6。

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