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摘要：本发明公开了一种龙香芋的遗传转化方法，属于生物技术领域。该遗传转化方法包括以下步骤：以芋头的顶芽或腋芽作为外植体进行愈伤组织诱导得到幼苗；切下该幼苗的茎段或叶片作为外植体，在预培养的培养基上进行预培养；转移到含有AS组分的农杆菌侵染液中进行孵育，得到侵染后的外植体；转移到共培养培养基中共培养；清洗所述共培养所得的外植体，转移到抗性脱分化培养基上继代培养，得到抗性愈伤组织；将所述抗性愈伤组织置于恢复培养基上进行继代培养，转入含有活性炭的分化培养基上培养得到丛生芽；所述丛生芽经生根、炼苗、假植和PCR鉴定后，得到阳性转基因芋头苗。本发明的遗传转化方法为建立稳定高效的芋头遗传转化体系奠定了基础。

主权项：1.一种芋头的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：以芋头的顶芽或腋芽作为外植体进行愈伤组织诱导得到幼苗；切下所述幼苗的茎段或叶片作为外植体，在预培养的培养基上进行预培养；转移到含有AS组分的农杆菌侵染液中进行孵育，得到侵染后的外植体；用无菌滤纸吸干外植体表面残留的菌液，转移到共培养培养基中共培养3-4d；用含有特美汀的无菌水清洗所述共培养所得的外植体，去除外植体表面水分，转移到含有谷氨酰胺的抗性脱分化培养基上继代培养，得到抗性愈伤组织；将所述抗性愈伤组织置于特美汀浓度递减的恢复培养基上进行继代培养，转入含有活性炭的分化培养基上培养得到丛生芽；所述丛生芽经生根、炼苗、假植和PCR鉴定后，得到阳性转基因芋头苗，最后进行定植；所述愈伤组织诱导是在愈伤组织诱导培养基上进行，所述愈伤组织诱导培养基的组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+2mg﹒L-16-BA+1mg﹒L-1NAA；所述预培养的培养基组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+2mg﹒L-12,4-D+1mg﹒L-16-BA+0.5mg﹒L-1NAA；所述农杆菌侵染液的制备方法为：将农杆菌的单菌落接种到YEB培养基中培养直至OD600值达到0.6-0.8；将活化过夜的农杆菌按1:100-1:50的比例接种到所述YEB培养基中培养至对数生长期；离心弃上清后加入到侵染液中去重悬菌体，调整重悬液的OD600值至0.1-0.3；所述侵染液的组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+2mg﹒L-12,4-D+1mg﹒L-16-BA+0.5mg﹒L-1NAA+100μmol﹒L-1AS；所述共培养培养基的组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+2mg﹒L-12,4-D+1mg﹒L-16-BA+0.5mg﹒L-1NAA+20μmol﹒L-1AS；所述抗性脱分化培养基的组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+2mg﹒L-12,4-D+1mg﹒L-16-BA+0.5mg﹒L-1NAA+200mg﹒L-1谷氨酰胺+7.5mg﹒L-1潮霉素+300mg﹒L-1特美汀；所述抗性愈伤组织置于特美汀浓度递减的恢复培养基上进行继代培养的方法为：14-16d继代培养1次，总共继代培养3次，期间每继代培养1次，特美汀的浓度减少50mg﹒L-1；所述继代培养第1次的恢复培养基组分为：4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+1mg﹒L-12,4-D+2mg﹒L-16-BA+0.5mg﹒L-1NAA+250mg﹒L-1特美汀+0.5g﹒L-1活性炭；所述分化培养基的组分为4.4g﹒L-1MS培养基+30g﹒L-1蔗糖+7g﹒L-1琼脂+2.5mg﹒L-1TDZ+150mg﹒L-1特美汀+0.5g﹒L-1活性炭。

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