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一种用于细菌识别、捕获与杀菌的适配体荧光传感方法 

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摘要:本发明公开了一种用于细菌识别、捕获与杀菌的适配体荧光传感方法,包括:制备AIECuNCs溶液,并对AIECuNCs溶液进行多粘菌素E修饰,获得多粘菌素EPME修饰后的AIECuNCs;培养细菌,并制备适配体功能化的磁珠;将标记有大肠杆菌适配体的链霉亲和素化的磁珠连结PME@AIECuNCs识别并捕获大肠杆菌,获得IMB@Apt‑EE.coliPME@AIECuNCs三明治结构;通过紫外灯照射使适配体中的光控基团PC‑linker断裂,磁性分离后取上清液,采用荧光光谱仪测荧光强度,实现对细菌的识别捕获。本发明提高了细菌检测的灵敏度和选择性,实现了对细菌的即时杀灭。

主权项:1.一种用于细菌识别、捕获与杀菌的适配体荧光传感方法,其特征在于,所述方法用于非疾病诊断与治疗的目的,包括:制备AIECuNCs溶液,并对所述AIECuNCs溶液进行多粘菌素E修饰,获得多粘菌素E修饰后的AIECuNCs;培养细菌,并制备适配体功能化的磁珠;将标记有大肠杆菌适配体的链霉亲和素化的磁珠连结PME@AIECuNCs识别并捕获大肠杆菌,获得IMB@Apt-EE.coliPME@AIECuNCs三明治结构;通过紫外灯照射使适配体中的光控基团PC-linker断裂,磁性分离后取上清液,采用荧光光谱仪测荧光强度,实现对细菌的识别捕获;所述制备AIECuNCs溶液的过程包括:在室温磁力搅拌下,将无水CuSO4溶液加入到2.4mL超纯水中,充分混匀后,再添加GSH溶液;转移至37℃水浴条件下磁力搅拌30min,随后用1M的NaOH溶液将体系的pH调至4.0~5.5;将反应溶液在37℃条件下剧烈搅拌1h,制备获得CuNCs溶液;将CeNO33·6H2O溶液加入到所述CuNCs溶液,定容后于室温条件下搅拌10min;再用MW=500Da的透析袋透析1h,制得所述AIECuNCs溶液;所述无水CuSO4溶液和GSH溶液的摩尔比为8:1;所述pH的范围为4.6~4.7;所述CeNO33·6H2O溶液的用量为20mM的溶液50μL;对所述AIECuNCs溶液进行多粘菌素E修饰,获得多粘菌素E修饰后的AIECuNCs的过程包括:在CuNCs中加入多粘菌素E和硝酸铈溶液,用水定容至8mL后进行磁力搅拌,制得多粘菌素E修饰的AIECuNCs;所述CuNCs的用量为1.6mL;所述多粘菌素E的用量为2.4mL4mgmL,用水定容至8mL后,剧烈搅拌1h;所述培养细菌的过程包括:将细菌菌落置于10mLLB液体培养基中,随后将细菌置于37℃的恒温振荡器中,以180rpm的速度培养过夜;所述细菌包括大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌;制备适配体功能化的磁珠的过程包括:将生物素和光控基团PC-linker标记的大肠杆菌适配体Apt-E与链霉亲和素标记的磁珠在27℃下反应1h,随后,用PBS缓冲溶液洗两次后,进行磁性分离,制得适配体功能化的磁珠IMB@Apt-E;将标记有大肠杆菌适配体的链霉亲和素化的磁珠连结PME@AIECuNCs识别并捕获大肠杆菌,获得IMB@Apt-EE.coliPME@AIECuNCs三明治结构的过程包括:将磁珠IMB@Apt-E与不同浓度的细菌液混匀,并用1×PBS定容至1mL,振荡孵育,磁性分离以后用Tri-HCl清洗2次,弃去上清液以洗去游离的细菌液;向溶液中分别加入多粘菌素E修饰的AIECuNCs,在27℃条件下振荡孵育1.5h形成IMB@Apt-EE.coliPME@AIECuNCs三明治结构;所述细菌液的浓度为:108~102CFUmL;所述振荡孵育的温度和时间分别对应为27℃、1h;所述Tri-HCl缓冲含有NaCl和MgCl2且pH=7.20;所述紫外灯为365nm的紫外灯,照射时间为4min。

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