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摘要:本发明涉及细胞耐药性快速检测领域,公开了一种用于活体细胞的耐药性快速灵敏精准的检测方法,包括以下具体步骤:在对待检测的活体细胞进行检测前先对所述待检测的活体细胞进行孵育,于孵育后的不同时间点连续检测标志物的浓度实现上述检测;在孵育前加入能够被所述待检测的活体细胞利用的检测试剂混合物以及进行耐药性检测的待测化合物;所述孵育是指将待检测的活体细胞加入确定浓度的培养液培养。本发明的优点在于,能够快速灵敏地对活体细胞的生长进行检测,包括其细胞耐药性的检测,发现目前方法不能检测到的“隐藏”耐药性,预防超级细菌和耐药肿瘤,开发高效新药等方面具有较高的应用价值。
主权项:1.一种用于体外活细胞的耐药性检测的方法,其特征在于,包括以下具体步骤:调整用于孵育的细胞培养液浓度,令待检测的活体细胞大致达到更优的生长速度,并加入能够被所述待检测的活体细胞利用的检测试剂混合物以及进行耐药性检测的待测化合物进行孵育,于孵育后按照预定的时间间隔连续检测标志物的浓度,实现上述检测;所述孵育是指将待检测的活体细胞加入确定浓度的培养液培养;耐药性是指待测化合物不能完全抑制待检测的活体细胞的生长;在浓度调整步骤完成后,对细胞培养液的浓度进行稀释,稀释范围是麦氏0.5稀释2-4000倍;或者在所述体外活细胞为快生长菌的情况下,使用40倍稀释;在优化的条件下,检测试剂混合物可以用速率法跟踪给药后细胞的生长,检测细胞耐药性,具体包括检测给药后细胞生长速率变化,与相对应的野生型细胞的生长速率进行比较;速率法是指按照预定的时间间隔连续检测标志物的浓度信号随时间的变化;在孵育所述待检测活体细胞同时,将等量的待检测活体细胞加入相同浓度的培养液中制成阳性对照组,并用相同浓度的培养液不加待检测活体细胞制成阴性对照组;进一步与阳性和阴性对照组孵育后检测标志物的浓度进行比对,得到所述待测化合物对所述待检测活体细胞的抑制率;所述活体细胞包括能产生NADPH的真菌、细菌、动物和人体细胞;所述检测试剂混合物包括具有以下结构通式的化合物: 其中,A1为和所述相连接的芳香基或杂环基团;A2为和所述相连接的芳香基或杂环基团;A3为和所述相连接的苯基;R1为H或者和所述A1相连接的至少一个R1取代基,所述R1取代基分别独立地选自-NO2、-SO3H、-SO2NH2、卤族元素、和所述A1稠合的杂环基团、烷基;R2为H或者和所述A2相连接的至少一个R2取代基,所述R2取代基分别独立地选自NO2,甲氧基,烷基,通过叠氮基连接的苯基、卤素原子,磺酸基及其盐和所述A2稠合的苯基或杂环基团;R3为和所述A3相连接的R3取代基;所述R3取代基各自独立地选自: 所述杂环基团包括1-2个杂原子,所述杂原子分别独立地选自Se、N、S或O;所述检测试剂混合物为EZMTT和电子偶联剂;所述检测试剂混合物的芳香基或杂环基团各自独立地选自
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