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摘要:本发明涉及红毛丹Nepheliumlappaceum植物提取物通过维持和或增加V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白‑1表达和或通过增加毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老来增强毛囊的用途。另一个主题涉及红毛丹提取物在包含至少一种美容化妆上可接受的赋形剂的美容化妆组合物中的用途以及包括局部应用红毛丹提取物或包含其的美容化妆组合物的美容化妆用护理方法。
主权项:1.红毛丹Nepheliumlappaceum种子提取物用于增强毛囊的非治疗性的美容化妆用途,特征在于所述提取物是通过在作为单一溶剂的水中提取得到的。
全文数据:红毛丹提取物的新美容化妆用途本发明的目的是红毛丹植物提取物的美容化妆用途。毛囊由与周围皮肤组织的表皮对应于头皮相连的外鞘、内鞘和毛干单独的毛发,由位于毛囊下半部毛球的上皮来源的高度增殖细胞产生组成。这些成纤维细胞通过触发毛囊进入其成长期、毛发生长初期、退行期或毛发生长中期、静止期或毛发生长终期而参与调控毛发和该皮肤乳头的生长。毛发周期的调控取决于多种分子信息和因素,所述信息和因素引导组装毛囊及其毛球的各种细胞的增殖、迁移、分化和相互作用。然而,许多外部和环境因素参与这些细胞的增殖及其分化。将特别提及的是紫外UV照射、激素变化、年龄和毒性物或污染物。这些环境因素对脱发具有直接后果,但是更通常地影响皮肤、包括头皮。这些因素将影响某些分子或基因靶标或特别是它们的蛋白质其中有胶原蛋白、肌原纤蛋白、内披蛋白或作为核苷酸的ATP的表达。已经证实了在从毛发生长终期至毛发生长初期的转变期间毛囊中的能量代谢且特别是线粒体活性的重要性。乳头成纤维细胞中ATP的刺激也是乳头成纤维细胞的代谢活性的指征,可以促进毛发生长。在毛囊中,肌原纤蛋白-1与LTBP-1一种确认的毛球标记物结合。其在上皮和间质干细胞分化中起重要作用。在毛囊中,肌原纤蛋白-1自始至终沿着个体毛发的结缔组织鞘、在毛囊和头皮之间的相接处表达。肌原纤蛋白-1也在皮肤乳头中表达,且被认为在将个体毛发锚定到头皮中起作用。因此,皮肤乳头的成纤维细胞构成了个体毛发生长、更通常是毛发护理的重要靶标。毛发老化是评价活性剂减少脱发或促进毛发生长的潜能的选择标记物。存在三种用于促进或维持毛发密度的策略:刺激生长期,减少现有毛发的脱落例如通过将个体毛发锚定于头皮的刺激,或通过形成或生长新的个体毛发来促进新的生长周期。特别地,已知用于刺激毛发生长和抗击脱发的药物领域的成分。它们是用于治疗脱发、主要是雄激素性脱发或激素依赖性病状的专用化学分子。而且,在美容化妆品领域中存在多种解决方案。另一方面,很少有成分已知同时刺激位于毛囊中的数个特定靶标、使得能够增强毛囊。红毛丹Nepheliumlappaceum植物,也称为红毛丹rambutan,是一种在东南亚、特别是马来西亚和印度尼西亚发现的树。其是高10至20米的树,产生大量果实。这种果实因其感官特性而有名,含有高剂量的糖、维生素C和铁。干燥根或叶的汤剂还已经被用于对抗发热。红毛丹植物在美容化妆组合物中的用途是已知的。因此,申请JP2002145730描述了种子提取物,其具有抗氧化和皮肤漂白作用以及润湿性质。然而,该申请既没有描述、也没有以具体方式公开所述植物提取物的用于增强毛囊或用于减少脱发的用途。申请JP2001220344公开了在各种美容化妆组合物中可能存在通过蒸馏获得的植物提取物名单,其中一种是红毛丹种子提取物。然而,该申请没有公开红毛丹提取物用于预防脱发或用于增强毛囊的用途。申请JP19910189133公开了一种或多种植物提取物其中一种是红毛丹提取物作为睾酮-5-α还原酶抑制剂用于治疗雄性激素性或激素依赖性脱发的用途。然而,公开的是红毛丹果皮提取物,而不是通过增强毛囊或通过促进所述毛发锚定于头皮来发挥作用的提取物。申请CN105534812公开了具有抗炎、抗老化以及润肤性质的组合物,所述组合物包含数种植物包括红毛丹提取物的混合物。然而,没有公开红毛丹的植物部分。申请JP2013245172公开了红毛丹提取物和毛蕊花VerbascumThapsusL.提取物的组合用于促进个体毛发生长的用途。红毛丹提取物可以是果皮、果实或种子提取物,优选果实提取物。然而,在该情况下,其涉及刺激个体毛发的生长。本发明与之不同,因为本发明通过增加某些局部靶标的表达和通过促进个体毛发锚定于头皮而靶向于增强毛囊,因此使得能够促进脱发减少。本发明的目的不是刺激毛发生长。最后,申请US20170151164、US20170151165和US20170151166公开了包含红毛丹油的美容化妆组合物,用于处置角蛋白纤维、特别是个体毛发。然而,这些申请没有描述其用于增强毛囊的用途,而且也没有描述用于减少个体毛发脱落的用途。因而,基于本申请人的知识,没有现有技术公开或提示红毛丹种子提取物用于增强毛囊和因而减少脱发的用途。本发明的提取物是红毛丹提取物。该植物来自越南。本申请人实际上已经令人惊奇地发现:通过增加毛囊成纤维细胞增殖、细胞存活力、ATP合成和线粒体活性和通过减轻细胞损伤及细胞衰老以及通过增加毛囊中一些局部靶标的表达,该提取物在增强毛囊方面是有效的。本发明的提取物的优点之一是其能够同时增加多个局部靶标的表达。其构成了用于毛发和头皮护理的完全活性成分。另一个优点是它是由符合获取规则的可持续发展操作产生的天然活性物质。例如,它是化学稳定的提取物,没有显示出致敏性质,并且可以容易地以工业规模生产。因此,本发明的第一个目标涉及红毛丹植物的种子提取物用于增强毛囊的美容化妆用途。术语“美容化妆用途”在本文中意欲表示非药用的用途,因此,它不是用于治疗目的,本发明的提取物意欲施用于健康皮肤区域、特别是非病理性头皮的全部或部分。术语“健康皮肤区域”意欲表示施用本发明的提取物并且被皮肤科医生描述为“非病理性”的皮肤区域,即,其未显示出任何感染、瘢痕、皮肤疾病或不适如念珠菌病、脓疱病、银屑病、湿疹、痤疮或皮炎或者创伤或损伤和或其它皮肤病。对于本发明的目的,皮肤包括身体和或面部的任何部分,有利地是包括皮肤附属器的那些,其中包括头皮,并且优选为头皮。本发明的提取物的美容化妆用途可以是通过口服或局部施用的,优选局部施用。因此,在本发明的一个实施方案中,本发明的提取物的美容化妆用途包括将提取物或包括其的美容化妆组合物局部施用至身体和或面部的全部或部分,选自腿,足,腋,手,大腿,腹部,颈线,颈,胳膊,躯干,背部,面部,优选包括皮肤附属器,优选毛发,和或头皮,有利地为头皮。术语“皮肤附属器”在本文中意欲指身体毛发、睫毛和头发。有利地,其为头发。本发明的提取物为局部用可接受的提取物,术语“局部用可接受”理解为指无皮肤刺激性、无毒并且不引起变态反应的提取物。术语“局部施用”意欲指直接应用提取物或包括其的美容化妆组合物或者将其喷雾到皮肤、优选头皮和或毛发的表面上。对于本发明的目的,表述“增强毛囊”意欲指维持和或增加个体头发至头皮的锚定,这在一方面通过维持和或增加毛囊和皮肤、因此头皮两者的成纤维细胞增殖和或通过增加头皮水平上的局部靶标的表达来实现,和或在另一方面通过增加细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老来实现。因此,在本发明的第一个方面,本发明的提取物通过增加头皮水平上的局部靶标的表达、特别是V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白-1有利地在头皮水平上的表达来增强毛囊。对于本发明的目的,表述“维持和或增加V型胶原蛋白的表达”意欲指:在本发明的提取物的存在下,与不存在提取物下检测的表达相比,胶原蛋白V的基因和或蛋白质表达增加至少20%、优选至少30%。有利地,其涉及V型胶原蛋白表达的增加,更有利地是在健康、即非病理性的皮肤成纤维细胞上测量。有利地,增加是在按照实施例1a制备的红毛丹种子提取物的存在下检测的;更有利地,测量是在实施例2所述的条件下通过免疫组织化学技术进行的。对于本发明的目的,表述“增加肌原纤蛋白-1表达”意欲指:在本发明的提取物的存在下,与不存在提取物下检测的表达相比,肌原纤蛋白-1的基因和或蛋白质表达增加至少50%、优选至少100%。在一个有利的实施方案中,其为肌原纤蛋白-1蛋白质增加,有利地在健康皮肤成纤维细胞的水平上测量,更有利地在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下检测。优选地,蛋白质表达的测量在实施例3所述的条件下、通过在抗-肌原纤蛋白-1抗体存在下的免疫组织化学BCA方法进行。在本发明的第二个方面,提取物通过增加ATP合成、有利地是在毛囊中的ATP合成来增强毛囊。因此,表述“增加ATP合成”意欲指:在本发明的提取物、有利地是种子提取物的存在下,在毛囊乳头的非病理性成纤维细胞中,ATP合成增加至少15%、优选至少25%、更优选至少40%。在本发明的一个特别有利的实施方案中,该增加是在实施例4所述的条件下、在按照实施例1a、更有利地是通过酶促法制备的种子提取物的存在下测量的。在第三个方面,本发明的提取物通过增加线粒体活性和或毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老来增强毛囊。表述“增加线粒体活性”意欲指:在本发明的种子提取物的存在下,所述活性增加至少15%、优选至少30%、更优选至少40%,有利地在毛乳头的正常即,非病理性成纤维细胞中测量,更有利地在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下测定。优选地,所述活性在实施例5所述的条件下、在琥珀酸脱氢酶的存在下、在MTT3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物还原之后通过光密度测量。表述“增加毛囊成纤维细胞增殖”意欲指:在本发明的种子提取物的存在下,与不存在提取物下检测的细胞数量相比,成纤维细胞中的细胞增加、即细胞数量的增加为至少60%、更有利地为至少90%。在本发明的一个实施方案中,该细胞增加是在皮肤新型乳头模型的成纤维细胞中测量的,有利地通过流式细胞仪测量。更有利地,细胞增加在实施例6所述的条件下、在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下测量。对于本发明的目的,表述“减轻细胞衰老”意欲指:在本发明的种子提取物的存在下,与在不存在提取物的所述成纤维细胞中测定的自身荧光相比,成纤维细胞的自身荧光的降低为至少10%、优选至少20%。有利地,自身荧光在毛囊乳头的成纤维细胞中测量,更有利地在新型乳头类型的模型的成纤维细胞中测量,更优选在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下。非常有利地,自身荧光在实施例7的条件下、通过流式细胞仪测量。对于本发明的目的,表述“增加细胞存活力”意欲指:在本发明的种子提取物的存在下,与不存在提取物检测的水平相比,细胞存活力增加为微毛囊microfollicles的细胞存活力的至少5%、有利地至少10%、更有利地至少20%。优选地,所述增加在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下、在实施例8a所述的条件下、更有利地通过比色法测量。对于本发明的目的,表述“减轻细胞损伤”意欲指:在本发明的种子提取物的存在下,微毛囊中、有利地是毛囊中的细胞裂解降低至少5%、优选至少10%、更优选至少40%。在本发明的一个有利的实施方案中,其为在按照实施例1a制备的种子提取物的存在下测量的膜损坏减轻。更有利地,该减轻在实施例8b所述的条件下、在乳酸脱氢酶的存在下、通过比色法测量。在一个特别有利的实施方案中,本发明的提取物通过增加毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或线粒体活性和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老来增强毛囊。因此,根据本发明,提取物使得能够减少皮肤附属器损失、优选脱发。表述“减少脱发”意欲指在毛发生长终期、即脱发期毛发密度减少至少1%、优选至少2%、更优选至少5%。在应用所述提取物例如2、4、5或6个月、优选6个月之后,与安慰剂相比,可以在本发明的提取物的存在下通过毛发图像技术phototrichogramtechnique、通过体内测定来测定毛发生长终期和毛发生长初期的毛发密度。本发明的提取物是红毛丹植物的种子提取物。对于本发明的目的,术语“种子提取物”意欲指包含种子、有利地仅包含种子的红毛丹植物的全部或部分的任意提取物。因此,在本发明的一个优选实施方案中,种子提取物不包括果皮,也不包括果肉。因此,种子提取物不是果实提取物。术语“果皮”在本文中意欲指果实的外壳。提取物可以通过本领域技术人员已知的各种提取方法获得,所述提取方法选自浸渍、热煎煮、磨碎、包括超声磨碎、利用搅拌机,或者提取物可以通过在亚临界或超临界条件二氧化碳下在水中提取获得。优选地,提取通过浸渍进行。提取可以采用干燥或新鲜材料、有利地是干燥材料、以相对于材料和提取溶剂的总重量而言0.1%至20%重量、有利地1%至20%、非常有利地5%至15%、更有利地10%至15%、甚至更有利地10%重量的量进行。提取可以在4℃至300℃的温度范围下进行。在本发明的一个优选实施方案中,提取将在4℃至25℃、更优选4℃至20℃的温度下、更有利地在环境温度、即20℃下进行。在本发明的一个供选实施方案中,提取将在60℃至90℃、优选70℃至85℃的温度下、更优选在80℃的温度下进行。在本发明的另一个供选实施方案中,提取将在水中、在亚临界条件下、在100℃至300℃、有利地120℃至250℃的温度范围下、更有利地在120℃下进行。提取可以在单个给定温度或在连续递增温度下进行。在本发明的一个有利实施方案中,提取将在120℃的单个温度下进行。在一个供选实施方案中,其将根据在100℃至200℃之间的三个递增温度的梯度进行,例如120℃、140℃、然后160℃,或者110℃、130℃、然后150℃,或者120℃、145℃、然后170℃。术语“在亚临界条件下提取”意欲指在水的存在下、在高于100℃的温度和低于221巴的压力的条件下进行的提取,从而水保持为液态,但是具有低于在环境温度下的水的粘度和表面张力,升高其介电常数。因此,提取压力将在150巴至250巴之间、优选在200至221巴之间、有利地在加压的提取高压釜中。提取可以进行30分钟至24小时、优选30分钟至12小时的时间,更优选1小时至5小时的时间,更有利地1小时至2小时的时间。非常有利地,提取将进行2小时的时间。本发明的提取物可以通过在溶剂或溶剂混合物中、优选质子极性溶剂和有利地在水、醇、二元醇、多元醇或者991至199ww的水醇、水二元醇或水多元醇混合物例如水与乙醇、甘油和或丁二醇和或其它二元醇如木糖醇和或丙二醇等混合、有利地在作为单一溶剂的水中提取而获得。特别地,提取物通过水性提取获得。对于本发明的目的,表述“通过水性提取获得的提取物”意欲指通过用含有相对于水性溶液的总重量而言超过60%重量、有利地至少70%重量、特别是至少80%重量、更特别是至少90%重量、特别是至少95%重量的水的水性溶液提取而获得的任意提取物,甚至更有利地,所述水性溶液不含有二元醇和特别是不含有醇,更特别是仅含有水。在一个供选实施方案中,提取物通过在各自比例80:20;vv的丙二醇或乙醇与水的混合物中提取而获得。在本发明的另一个供选实施方案中,提取可以在非离子表面活性剂的存在下进行,所述非离子表面活性剂优选选自BASF以名称1200UP销售的月桂基葡糖苷或者还有辛酰基辛酰葡糖苷810UP,优选辛酰基辛酰葡糖苷810UP。相对于提取物的总重量而言,非离子表面活性剂的重量浓度可以为0.5%至5%、有利地为0.5%至1%,更有利地其为1%重量。因此,在本发明的第一个实施方案中,提取物是通过将相对于溶剂和材料的重量而言10%重量的磨碎种子在20℃的温度下浸渍2小时获得的。在实施例1a所述的条件下将提取物粗品离心、倾析和然后过滤。在本发明的第二个实施方案中,提取物是通过将相对于溶剂和材料的总重量而言5%重量的磨碎种子在20℃的温度下在作为溶剂的水中浸渍24小时获得的。在实施例1b所述的条件下将提取物粗品离心、倾析和然后过滤。在本发明的第三个实施方案中,提取物通过将20%的量的磨碎种子在20℃的温度下在作为溶剂的水中浸渍2小时获得。然后,在实施例1c所述的条件下,将提取物离心、倾析、过滤和然后在麦芽糖糊精的存在下喷雾干燥,麦芽糖糊精的最终量相对于最终提取物的总重量而言为80%重量。在第四个实施方案中,提取物是通过将相对于材料和溶剂的总重量而言10%重量的磨碎种子在80℃的温度下在乙醇:水混合物80:20;vv中浸渍1小时获得的。然后,在实施例1d所述的条件下,将提取物离心、倾析、过滤和然后在麦芽糖糊精的存在下喷雾干燥,麦芽糖糊精的最终量相对于最终提取物的总重量而言为80%重量。在第五个实施方案中,提取物将通过将相对于果皮和作为单一溶剂的水的总重量而言10%重量的红毛丹干燥果皮在20℃的温度下浸渍1小时而获得。将所得提取物倾析和离心,将上清液过滤。在实施例1e所述的条件下,提取物为粉末形式。在第六个实施方案中,提取通过采用相对于果肉和水的总重量而言10%重量的红毛丹果肉在80℃的温度下在作为唯一溶剂的水中浸渍1小时来进行。在实施例1f所述的条件下将提取物粗品倾析、离心和然后过滤。在第七个实施方案中,提取采用10%重量的量的红毛丹干燥种子、在超临界条件下、在加压的提取高压釜中、在作为助溶剂的乙醇10%的存在下进行。在实施例1g所述的条件下,将提取物粗品倾析、离心和然后过滤。在第八个实施方案中,提取采用相对于叶子和水的总重量而言10%重量的红毛丹干燥叶子在80℃的温度下进行1小时。在实施例1h所述的条件下,将提取物粗品倾析、离心和然后过滤。在第九个实施方案中,提取采用相对于果皮和溶剂的总重量而言10%重量的红毛丹果皮在乙醇:水混合物80:20;vv中于回流进行1小时。在实施例1i所述的条件下,将提取物粗品倾析、离心和然后过滤。有利地,根据本发明,提取物将以0.45μm的截留阈值过滤。在提取的任意阶段和根据本领域技术人员已知的技术可以对提取物进行另外的脱色和或脱臭步骤。具体而言,可以用活性炭对提取物脱色。在实施例1a至1g中所述的条件下获得的提取物可以通过蒸除溶剂或干燥、例如通过冷冻干燥或在麦芽糖糊精存在下喷雾干燥进行浓缩。有利地,在此情况下,将在麦芽糖糊精的存在下进行喷雾干燥。提取物将为粉末形式。因此,在本发明的一个特定实施方案中,按照实施例1a、1b和1d至1g得到的提取物将在相对于所得粉末的总重量而言重量浓度为20%至90%、优选40%至80%、更优选70%至80%的麦芽糖糊精的存在下进行喷雾干燥。在本发明的一个特定实施方案中,特别是对于其在皮肤病学中的用途,将所获得的红毛丹提取物进行灭菌。非常优选地,在作为单一溶剂的水中得到的种子提取物、特别是在实施例1a至1c中所述的那些含有可忽略不计的量的脂肪酸、特别是亚油酸。表述“可忽略不计的量的脂肪酸”意欲指非活性的脂肪酸含量,即,其不能增强毛囊,也不能减少皮肤附属器损失、特别是脱发。当在作为单一溶剂的水中得到的种子提取物、特别是如实施例1a至1c中所述的那些中获得的脂肪酸含量相对于种子提取物的总重量而言小于80%ww、有利地小于50%ww、更有利地小于20%ww重量时,所述含量被认为是可忽略不计的。非常有利地,所述提取物、特别是如实施例1a至1c中所述的那些含有相对于种子提取物的总重量而言小于2%重量的脂肪酸的脂肪酸含量,特别有利地仅含有痕量的脂肪酸。在本发明的一个特定实施方案中,种子提取物、特别是如实施例1a至1c中所述的那些含有可忽略不计的量的亚油酸,其定义为相当于不能增强毛囊、也不能减少皮肤附属器损失、特别是脱发的亚油酸含量。当在作为单一溶剂的水中得到的种子提取物、特别是如实施例1a至1c中所述的那些中含有的亚油酸C18H32O2;分子量280.452gmol的含量为相对于种子提取物的总重量而言小于10%ww、有利地小于6%ww、更有利地小于3%ww重量的亚油酸时,所述含量被认为是可忽略不计的。非常有利地,所述提取物、特别是如实施例1a至1c中所述的那些含有相对于种子提取物的总重量而言小于2%重量的脂肪酸的亚油酸含量,特别有利地仅含有痕量的亚油酸。本发明的提取物可以以美容化妆用活性成分的形式单独使用或者被包括在美容化妆组合物中。当其以美容化妆成分的形式单独使用时,其优选溶解在含有甘油的水性溶液中,有利地以相对于包含提取物的水性溶液的总重量而言60%至90%、更有利地70%至85%的浓度、非常有利地以80%重量的浓度存在。在本发明的一个供选实施方案中,提取物将溶解和或稀释在溶剂中,特别是极性溶剂,例如水、醇、多元醇、二元醇如戊二醇和或丁二醇和或己二醇和或辛酰二醇caprylylglycol或它们的混合物,优选水-乙醇酸混合物,更优选含有选自己二醇、辛酰二醇及其混合物的二元醇。有利地,将所得提取物稀释和或溶解在含有己二醇、特别是含有相对于美容化妆成分的总重量而言0.1%至10%重量的己二醇、优选0.5%至5%重量的己二醇的水性溶液中。有利地,将所得提取物稀释和或溶解在含有辛酰二醇、特别是含有相对于包含提取物的水性溶液的总重量而言0.01%至5%重量的辛酰二醇、优选0.1%至1%重量的辛酰二醇的水性溶液中。特别地,其中溶解了本发明的红毛丹提取物的水性溶液包含黄原胶,特别是相对于水性溶液的总重量而言0.01%至5%重量的黄原胶,更特别是相对于包含提取物的水性溶液的总重量而言0.1%至1%重量的黄原胶。有利地,其中溶解了本发明的红毛丹提取物的溶液包含己二醇、辛酰二醇和黄原胶。因此,根据本发明的一个特别有利的实施方案,用于通过维持和或增加毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或减轻细胞损伤和或细胞衰老来增强毛囊的提取物的使用是种子提取物。因此,本发明的另一个主题涉及本发明的提取物在包含至少一种美容化妆上可接受的赋形剂的美容化妆组合物中的用途。术语“可接受”意欲指赋形剂是美容化妆用的或无皮肤刺激性,其不引起变态反应,并且是化学稳定的。因此,美容化妆组合物的用途是用于增强毛囊,这是通过维持和或增加V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白-1表达和或毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老、有利地通过维持和或增加毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或线粒体活性和或通过减轻细胞损伤和或细胞衰老来实现的。包括本发明的种子提取物的美容化妆组合物可以用作美容化妆组合物用于毛发护理,有利地用于减少皮肤附属器损失、优选脱发。在本发明的一个实施方案中,所述美容化妆组合物将局部或口服施用;有利地,其将局部应用于选自如下的身体的全部或部分:腿,足,腋,手,大腿,腹部,颈线,颈,胳膊,躯干,背部,面部,包括皮肤附属器、优选毛发,和或头皮,更有利地头皮。在本发明的一个实施方案中,本发明的提取物在美容化妆或皮肤病学组合物中以相对于组合物总重量而言1×10-4%至10%、优选1×10-4%至5%、更优选1×10-3%至3%重量的浓度存在。赋形剂可以选自表面活性剂和或乳化剂、防腐剂、缓冲剂、螯合剂、变性剂、遮光剂、pH调节剂、还原剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂、成膜聚合物、填充剂、吸油剂matifyingagents、光泽外观剂shiny-appearanceagents、色素、染料、芳香剂及它们的混合物。CTFACosmeticIngredientHandbook,第二版1992描述了适用于本发明的各种美容化妆赋形剂。有利地,赋形剂选自聚甘油、酯、纤维素聚合物及衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E及其衍生物、黄原胶、天然蜡和合成蜡、植物油、甘油三酯、非皂化物、植物甾醇、硅酮、蛋白质水解物、甜菜碱、氧化胺aminoxides、植物提取物、蔗糖酯、二氧化钛、甘氨酸和尼泊金酯,更优选选自硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、二元醇-15硬脂基醚、鲸蜡醇、苯氧乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、丁二醇、辛酰二醇、天然生育酚、甘油、二羟基鲸蜡基磷酸钠、异丙基羟基鲸蜡基醚、硬脂酸乙二醇酯、三异壬精、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、异构烷烃、月桂醇聚醚-7、卡波姆、丙二醇、己二醇、甘油、没药醇、二甲基硅油、氢氧化钠、PEG30-二聚羟基硬脂酸酯、癸酸辛酸甘油三酯、鲸蜡基辛酸酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、西蒙得木油、硫酸镁、EDTA、环甲硅油、黄原胶、柠檬酸、月桂硫酸钠、矿物蜡和矿物油、异硬脂酸异硬脂醇酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、PEG8、蜂蜡、氢化棕榈仁油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、鲸蜡醇乳酸酯、羊毛脂醇、蓖麻油、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯、等渗盐水、及其混合物。美容化妆组合物可以选自水性或油性溶液,霜剂或者水性凝胶或油性凝胶,特别是沐浴凝胶,奶液milk,乳剂、微乳剂或纳米乳剂且特别是水包油型或油包水型或复合型或基于硅酮的,面膜,精华液,乳液lotion,液体皂,皮肤病学用棒状物dermatologicalbar,软膏,泡沫剂,贴剂,无水产物且其优选为液体、糊剂或固体,香波。有利地,其为乳液。或者,其为香波。而且,美容化妆组合物可以包含具有与本发明的提取物相同性质且可以或不可以引起与本发明的提取物的协同作用的其它美容化妆物质或者具有互补作用的美容化妆物质。作为发挥对抗脱发的作用的活性剂,将提及下述物质的组合:磺基肽sulfopeptides、氨基酸、氨基糖、B族维生素、锌和本申请人以名称TrichogenTMLS8960销售的人参Panaxginseng和Artiummajus提取物或者毛发保护剂如本申请人以名称LitchidermTM销售的荔枝Litchichinensis果皮提取物、舒缓和止痒活性剂如本申请人以名称PhytosootheTMLS9766销售的油菜籽植物甾醇。组合物中可以存在其它类型的活性剂,例如特别地作为用于毛发护理的抗氧化活性剂以名称DN-AgeTM销售的翅荚决明Cassiaalata叶子提取物,作为脱糖剂deglycatingagent以名称CollRepairTM销售的丹参Salviamiltiorhizza提取物与烟酰胺的组合,或促进皮肤紧致性的活性剂如以名称DermicanTM销售的合成四肽、以名称LinefactorTM销售的黄葵Hibiscusabelmoschus提取物、以名称ProteasylTM销售的纯化的豌豆提取物、以名称ElestanTM销售的Manilkaramultinervis提取物、以名称CollaliftTM18销售的非洲楝Khayasenegalensis提取物、本申请人以名称ArgassentialTM销售的摩洛哥坚果argan果肉提取物、以名称SqisandrylTM销售的五味子Schizandrachinensis提取物、以名称EperulineTM销售的镰形木荚苏木Eperuafalcata提取物、以名称MAT--XSTMBright销售的Orthosiphonstaminus提取物,它们是本申请人所销售的。活性剂的这些组合能够增强毛囊和减少脱发。另一个主题还涉及美容化妆用护理方法,包括局部或口服施用本发明的种子提取物或包含其的美容化妆组合物用于维持和或增加V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白-1表达和或用于增加毛囊成纤维细胞增殖和或用于增加细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或减轻细胞损伤和或减轻细胞衰老,用于增强毛囊和因而减少皮肤附属器损失、优选脱发。优选地,施用为局部施用。非常有利地,美容化妆用护理方法将包括局部应用种子提取物用于维持和或增加毛囊成纤维细胞增殖和或用于增加细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或减轻细胞损伤和或减轻细胞衰老,用于增强毛囊,这是为了减少脱发。在本发明的一个实施方案中,美容化妆用护理方法包括将本发明的提取物或包含其的组合物局部应用至选自如下的身体的全部或部分:腿,足,腋,手,大腿,腹部,颈线,颈,胳膊,躯干,背部,面部,包括皮肤附属器,优选毛发,和或头皮,更有利地为头皮。实施例参照本发明的说明书并提供如下。这些实施例以解释说明的方式给出,并且不以任何方式限制本发明的范围。每个实施例都具有通用范围。实施例是本发明的组成部分,基于说明书的整体、包括实施例相对于任何现有技术显示是新的任何特征都是本发明的组成部分。最后,在实施例中,温度以摄氏度表示,百分比为重量体积,压力为大气压力,另有说明除外。实施例1:本发明的红毛丹提取物的制备方法实施例1a:通过在20℃的温度下、在作为溶剂的水中浸渍2小时,获得了相对于溶剂和种子的总重量而言10%重量的量的磨碎的红毛丹种子。将提取物粗品离心,倾析,然后过滤。实施例1b:通过在20℃的温度下、在作为溶剂的水中浸渍24小时,获得了相对于溶剂和种子的总重量而言5%重量的量的磨碎的红毛丹种子。将提取物粗品离心,倾析,然后过滤。实施例1c:通过在20℃的温度下、在作为溶剂的水中浸渍2小时,获得了相对于溶剂和种子的总重量而言20%重量的量的磨碎的红毛丹种子。将提取物粗品离心,倾析,然后过滤。将提取物在麦芽糖糊精的存在下喷雾干燥,麦芽糖糊精的最终量相对于最终提取物的总重量而言为80%重量。实施例1d:通过在80℃的温度下、在作为溶剂的乙醇:水混合物80:10;vv中浸渍1小时,获得了相对于溶剂和种子的总重量而言10%重量的量的磨碎的红毛丹种子。将提取物粗品离心,倾析,然后过滤。将提取物在麦芽糖糊精的存在下喷雾干燥,麦芽糖糊精的最终量相对于最终提取物的总重量而言为80%重量。实施例1e:通过在20℃的温度下浸渍1小时,将相对于果皮和水的总重量而言10%重量的量的红毛丹干燥果皮进行了提取。将所得提取物倾析,离心,然后将上清液过滤。提取物为粉末形式。实施例1f:通过采用相对于果肉和水的总重量而言10%重量的红毛丹果肉在80℃的温度下在作为唯一溶剂的水中浸渍1小时进行了提取。将提取物粗品倾析,离心,然后过滤。实施例1g:采用10%重量的量的红毛丹干燥种子、在超临界条件CO2下、在加压的提取高压釜中、在助溶剂乙醇10%的存在下进行了提取。将提取物粗品倾析、离心和然后过滤。实施例1h:通过在20℃的温度下浸渍1小时,将相对于叶子和作为唯一溶剂的水的总重量而言10%重量的红毛丹干燥叶子进行了提取。将所得提取物倾析,离心,然后将上清液过滤。提取物为粉末形式。实施例1i:通过于回流浸渍1小时,将相对于果皮和溶剂的总重量而言10%重量的红毛丹果皮在乙醇:水混合物80:20;vv中进行了提取。将所得提取物倾析,离心,然后将上清液过滤。提取物为粉末形式。实施例2:在种子提取物的存在下V型胶原蛋白表达的增加方案:将源自34岁健康供体的称为“正常”即,未显示出任何病状的人成纤维细胞在不同终浓度的各种红毛丹提取物的存在下、在确定的培养基FGM中培养48小时,然后除去细胞培养基。未添加本发明的提取物的相同培养基用作对照对照。将所得细胞层用氢氧化铵溶液裂解,然后用在缓冲溶液PBS中稀释至14000的抗-胶原蛋白V抗体测定V型胶原蛋白。60分钟后,应用稀释至125000的二级抗体达60分钟。在洗涤后,加入显示溶液,测定荧光ENVision,PerkinElmer。将荧光结果相对于没有红毛丹提取物的存在下用相同细胞培养基得到的荧光对照进行标准化,使其与在每个条件下得到的DNA量相关。所示结果为3次测定的平均值n=3SD:标准偏差。结果:表1平均值SD对照1005按照实施例1a制备的红毛丹种子提取物1%wv培养基13425按照实施例1e制备的红毛丹果皮提取物1%wv培养基7018结论:在所分析的成纤维细胞中,红毛丹种子提取物使V型胶原蛋白表达增加至少23%,显示了种子提取物在增强毛囊和减少脱发方面的性质。实施例3:在本发明的提取物的存在下肌原纤蛋白-1合成增加的证实方案:将正常即,非病理性人成纤维细胞在FGM培养基中培养48小时,然后用实施例1a的水性红毛丹种子提取物处理,最终重量浓度相对于培养基的最终体积为1%。采集细胞,然后用裂解缓冲液裂解以进行免疫印迹法WesternBlots。通过BCA方法测定了蛋白质浓度。将所有样品相对于蛋白质总量进行标准化n=3。使用抗-肌原纤蛋白-1一级抗体LS-BIO,因为是过氧化物酶-偶联的二级抗体。化学发光底物使得能够说明信号并对其进行定量ProteinSimple。结果:表2平均值SD对照100.010.0红毛丹种子提取物1%wv培养基,实施例1a27295.0按照实施例1e制备的红毛丹果皮提取物1%wv培养基55.2012.4按照实施例1i制备的红毛丹果皮提取物1%wv培养基83.7120.2结论:与对照相比和与在培养基中在相同终浓度下测试的果皮提取物相比,红毛丹种子提取物显示出在成纤维细胞中的肌原纤蛋白-1合成增加。实施例4:在本发明的提取物的存在下毛囊乳头成纤维细胞中ATP合成增加的证实方案:将来自毛囊乳头的非病理性人成纤维细胞在DMEM培养基上培养24小时,然后用本发明的水性红毛丹种子提取物处理6天,终浓度体积相对于培养基总体积而言为0.03%和0.01%体积。在6天后通过酶促法荧光素荧光素酶络合物;ATPBioluminescencekitRocheDiagnostics测量ATP含量。表3平均值SD对照1007红毛丹种子提取物,实施例1a0.03%%vv1386红毛丹种子提取物,实施例1a0.1%%vv1393结论:种子提取物与对照相比显示出ATP合成增加,使其成为用于增强毛囊的活性提取物。实施例5:本发明的提取物增加毛乳头成纤维细胞的线粒体代谢活性的证实方案:将毛囊乳头的非病理性人成纤维细胞培养24小时,然后用水性红毛丹种子提取物处理6天,终浓度相对于培养基总体积而言为0.1%和0.3%体积。在琥珀酸脱氢酶的存在下、通过MTT3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物的还原测量了成纤维细胞的线粒体活性。将所得沉淀物用DMSO提取,然后于540nm测量DMSO溶液的光密度。结果:表4平均值SD对照1002水性红毛丹种子提取物,实施例1a0.1%vv1214水性红毛丹种子提取物,实施例1a0.3%vv1454结论:水性红毛丹种子提取物与对照相比显示出毛囊乳头成纤维细胞的线粒体活性增加至少15%一直到47%。该线粒体活性参与毛囊的增强,使得能够减少脱发。实施例6:在新型乳头类型的细胞模型中成纤维细胞增殖的增加方案:将来自皮肤新型乳头模型的非病理性人成纤维细胞在DMEM培养基上培养,所述DMEM培养基包含终浓度相对于培养基总体积而言为0.3%或1%体积的本发明的提取物,然后以200g离心5分钟。将聚集物于37℃5%CO2培养5天,然后在PBS缓冲液中洗涤。将细胞在含有EDTA的蛋白酶混合物中于37℃裂解1小时。用流式细胞仪测定细胞增加。结果:表5平均值SD对照10022水性红毛丹种子提取物,实施例1a0.3%vv16310结论:本发明的提取物显示出其能够使新型乳头模型中的皮肤乳头成纤维细胞增殖增加至少25%,证实其在增强毛囊方面的积极作用以及其减少脱发的性质。实施例7:在新型乳头类型的细胞模型中自身荧光参数的减少方案:将正常的非病理性人成纤维细胞混悬于DMEM培养基中,所述DMEM培养基包含按照实施例1a制备的本发明的种子提取物,终浓度相对于培养基总体积为1%。在离心后,将聚集物于37℃5%CO2培养5天。将聚集物在PBS缓冲液中洗涤,然后将细胞在蛋白酶与EDTA的混合物中裂解。使用C6流式细胞仪Becton-DickinsonUK585nm+-20nm测定细胞的自身荧光。结果表示为相对于对照的%。结果:表6平均值SD对照1008水性红毛丹种子提取物,实施例1a1%vv742结论:种子提取物证实了其能够使成纤维细胞的自身荧光降低至少20%,因此能够减轻毛囊乳头中成纤维细胞的衰老。实施例8:本发明的提取物对微毛囊的作用的证实微毛囊重建方法:微毛囊模型包括将乳头成纤维细胞、来自毛囊外鞘的角质形成细胞和黑素细胞在三维上共培养。由于能够整合各种细胞类型之间的神经-表皮-间质相互作用,该细胞模型构成了最接近毛囊的重建器官模型。培养了微毛囊。将非病理性乳头成纤维细胞培养3天。然后,将黑素细胞和毛囊外鞘的角质形成细胞加入到新型乳头中以形成微毛囊。培养24小时后,加入水性红毛丹种子提取物,终浓度相对于培养基总体积而言为0.02%体积。将相同的培养基在不存在本发明的提取物的情况下培养对照。处理48小时后,对培养基和微毛囊采样用于分析。实施例8a:微毛囊水平上的细胞存活力的增加方案:通过PrestoBlue方法ThermoFisherScientific测量了微毛囊的细胞存活力。该比色法是基于活细胞引起的刃天青类型试剂的荧光减少和发射。处理48小时后进行测定。值表示为用未经处理的对照进行标准化后的平均值%。结果:表7平均值SD对照1006.7水性红毛丹种子提取物,实施例1a0.02%vv118.06.5结论:本发明的种子提取物具有增加微毛囊的细胞存活力的能力,使其成为对增强毛囊具有活性的提取物。实施例8b:微毛囊水平上的膜损伤的减轻方案:在乳酸脱氢酶的存在下通过比色法测量了细胞损伤,使得能够基于培养基中受损细胞中乳酸脱氢酶活性的测量来定量提取物的细胞毒性。细胞膜损伤的增加和细胞溶解导致乳酸脱氢酶活性增加,其与裂解细胞的数量成比例。该活性是在甲的存在下证实的,甲的量通过测量光密度500nm进行评价。处理48小时后,在培养基中进行了测量。结果:表8平均值SD对照10015.9水性红毛丹种子提取物,实施例1a0.02%vv58.016.3结论:本发明的种子提取物具有减轻膜损伤的能力,使其成为对增强毛囊具有活性的提取物,增强毛囊促进了脱发的减少。实施例9.包含红毛丹提取物的美容化妆成分的实例实施例1a至1c的红毛丹提取物相对于总重量而言20%麦芽糖糊精相对于总重量而言80%实施例10.包含本发明的提取物的美容化妆组合物的实例
权利要求:1.红毛丹Nepheliumlappaceum种子提取物用于增强毛囊的美容化妆用途,特征在于所述提取物是通过在作为单一溶剂的水中提取得到的。2.根据权利要求1的用途,用于维持和或增加V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白-1表达和或用于增加毛囊成纤维细胞增殖和或用于增加细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或减轻细胞损伤和或减轻细胞衰老。3.根据权利要求1和2任一项的提取物的用途,用于减少皮肤附属器损失、优选脱发。4.根据权利要求1-3任一项的提取物的用途,特征在于所述用途是通过局部应用进行的。5.根据权利要求1-4任一项的提取物的用途,特征在于所述提取物在包含至少一种美容化妆上可接受的赋形剂的美容化妆组合物中以相对于美容化妆组合物总重量而言1×10-4%至10%、优选1×10-4%至5%、更优选1×10-3%至3%重量的终浓度存在。6.根据权利要求1-5任一项的提取物的用途,特征在于所述提取物存在于选自如下的美容化妆组合物中:水性或油性溶液,霜剂或者水性凝胶或油性凝胶、特别是沐浴凝胶,奶液,乳剂、微乳剂或纳米乳剂且特别是水包油型或油包水型或复合型或基于硅酮的,面膜,精华液,乳液,液体皂,皮肤病学用棒状物,软膏,泡沫剂,贴剂,无水产物且其优选为液体、糊剂或固体,香波,有利地为乳液。7.美容化妆用护理方法,包括局部或口服施用权利要求1-6任一项的提取物或包含其的美容化妆组合物,用于增强毛囊和或减少皮肤附属器损失、优选脱发。8.根据权利要求7的美容化妆用护理方法,特征在于其维持和或增加V型胶原蛋白和或肌原纤蛋白-1表达和或毛囊成纤维细胞增殖和或细胞存活力和或ATP合成和或线粒体活性和或减轻细胞损伤和或细胞衰老。9.根据权利要求7和8任一项的美容化妆用护理方法,特征在于其包括局部应用至选自如下的身体的全部或部分:腿,足,腋,手,大腿,腹部,颈线,颈,胳膊,躯干,背部,面部,包括皮肤附属器,优选毛发,和或头皮,更有利地为头皮。
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