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摘要：本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了一种使用邻近标记检测技术研究神经元应激下糖蛋白时序性变化的方法，包括以下步骤，构建邻近标记系统、细胞培养与应激诱导、标记与捕获、质谱检测和数据分析。本发明依据糖蛋白的动态变化对于神经元信号转导、稳态维持具有重要作用的理论基础，针对基于质谱现有技术检测难度大、缺乏亚细胞区室糖蛋白动态变化的问题，本发明将利用邻近标记结合蛋白质组学技术，绘制全景式糖蛋白时空分辨表达谱，证实糖蛋白在神经元稳态维持中的作用；实现高效监测神经元应激反应下糖蛋白的时序性变化特征，提高了糖蛋白动态变化检测的时空分辨率，对相关疾病的研究具有重要意义。
主权项：1.一种使用邻近标记检测技术研究神经元应激下糖蛋白时序性变化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.构建邻近标记系统：将内质网跨膜蛋白Sec61b与抗坏血酸过氧化物酶APEX2进行融合，中间插入标签蛋白V5Sec61b-V5-APEX2，随后将上述融合蛋白分别插入pcDNA3和pLVX-IRES-Hyg的载体中，构建可诱导的邻近标记系统；S2.细胞培养与应激诱导：将构建的标记系统引入人胚肾细胞和神经元细胞确立标记方法，并应用刺激物以诱导神经元应激反应；S3.标记与捕获：在生理或应激条件下，诱导抗坏血酸过氧化物酶活化，内质网腔内的糖蛋白会被生物素化，随后通过链霉亲和素琼脂糖珠捕获；S4.质谱检测：对捕获的糖蛋白进行质谱分析，检测糖蛋白的时序性变化；S5.数据分析：通过生物信息学工具分析糖蛋白的动态变化，识别关键的应激响应分子及其功能路径。
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百度查询： 中国人民解放军空军军医大学 一种使用邻近标记检测技术研究神经元应激下糖蛋白时序性变化的方法
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