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摘要：本发明提供了一种基于RT‑LAMP‑Cas14a无PAM限制的石斑鱼神经坏死病毒检测方法，所述方法是一种基于一组特异性的神经坏死病毒RNART‑LAMP扩增引物，在FIP引物的3’端引入PAM序列，经过60℃恒温扩增后其产物被CRISPR‑Cas14a特异性识别，随后激活Cas14a酶并触发其非特异性反式切割能力的一种方法。具体涉及水产病毒快速诊断领域。由于神经坏死病毒RNA核酸序列不含Cas14a识别的PAM序列，本发明对RT‑LAMP扩增引物进行改造，实现RNA核酸一步法扩增与CRISPR‑Cas14a相结合，使其突破了Cas14a检测技术的限制，为神经坏死病毒提供一种高特异性、高灵敏度的检测技术。
主权项：1.一种基于RT-LAMP-Cas14a无PAM限制的水产神经坏死病毒检测方法，其特征在于，设计的RT-LAMP引物组可在等温扩增后引入PAM序列，含PAM位点的扩增产物可被Cas14a和sgRNA复合物特异性识别，并激活Cas14的反式切割活性，非特性切割ssDNA报告探针进而得到可视化检测信号。
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百度查询： 海南大学 一种基于RT-LAMP-Cas14a无PAM限制的水产神经坏死病毒检测方法
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