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摘要：本发明属于RNA快速检测技术领域，具体涉及一种病毒RNA的快速扩增、侧层析检测方法及应用。本发明将病毒核酸粗提物经过单管复合酶反应体系逆转录、限制性内切酶酶切和单向等温链置换扩增，进而产生大量带有标记物的特定序列单链DNA；在侧层析过程中，该单链DNA被病毒RNA检测试纸上检测区固定的核酸探针捕获，同时，胶体金颗粒上标记的亲和素结合被固定单链DNA上标记的生物素，胶体金颗粒被间接固定显色指示结果。本发明提供的方法，操作简便，无需繁杂的核酸抽提，检测全程无需大型设备，且结果可裸眼判读，可实现现场快速检测，具有简便，快速、灵敏度高和成本低的优点。
主权项：1.一种病毒RNA的快速扩增方法，其特征在于包含如下步骤：S1、用裂解液裂解含有病毒RNA的待测样本，得到病毒核酸粗提物；S2、将步骤1获得的病毒核酸粗提物与混合酶反应体系混匀，并置于40-45℃反应20-40min，得到扩增产物，即为带有标记物的单链DNA片段；其中，所述的混合酶反应体系包含如下组分：逆转录酶buffer、逆转录酶、DNA聚合酶buffer、DNA聚合酶、切刻内切酶、限制性内切酶、dNTPsMix、标记物修饰的dUTP、逆转录引物、延伸引物和牛血清蛋白；步骤S2中所述的逆转录引物和延伸引物扩增的核酸产物片段内部靠近延伸引物3’端有限制性内切酶的单一位点；混合酶反应体系中的对应的限制性内切酶可以识别并切割该位点；步骤S2中所述的逆转录引物上设有切刻内切酶识别位点，混合酶反应体系中的对应切刻内切酶可以识别并切割逆转录引物上的切刻内切酶位点。
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百度查询： 华南农业大学 一种病毒RNA的快速扩增、侧层析检测方法及应用
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